饲料中粗蛋白的测定方法

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1、饲料中粗蛋白的测定方法本标准参照采用ISO5983—1979《动物饲料—氮含量的测定和粗蛋白含量计算》1.1主要内容与适用范围本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。1.2引用标准GB601化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备1.3原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在被催化剂的作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮量转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。1.4试剂1.4.1硫酸（GB625）：化学纯，含量为98%，无氮。1.4.2混合催化剂：0.4g五

2、水硫酸铜，6g硫酸钾或无水硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。1.4.3氢氧化钠（GB629）：化学纯，40%水溶液（M/V）。1.4.4硼酸（GB628）：化学纯，2%水溶液（M/V）。1.4.5混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。1.4.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定。1.4.70.1mol/盐酸（HCL）标准溶液：8.3ml盐酸（GB622），分析纯，注入1000ml蒸馏水中。1.4.80.2mol/盐酸（HCL）标准溶液：1.67ml盐酸（GB622），分析纯，注入1000ml蒸馏水中。1.1.1

3、蔗糖（HG3—1001）：分析纯。1.1.2硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。1.1.3硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000ml，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10ml，0.1%甲基红乙醇溶液7ml，4%氢氧化钠水溶液0.5ml，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。1.5仪器设备1.5.1实验室用样品粉碎机或研钵。1.5.2分析筛：孔径0.42mm（40目）。1.5.3分析天平：感量0.0001g。1.5.4消煮炉或电炉。1.5.5滴定管：酸式（A级），10、25mL。1.5.6凯氏烧瓶：250mL。1.5.7凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。1

4、.5.8锥形瓶：150、250mL。1.5.9容量瓶：100mL。1.5.10消煮管：250mL。1.5.11定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白测定仪。1.6试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。1.7分析步骤1.7.1试样的消煮称取试样0.5g~1g(含氮量5mg~80mg)准确至0.0002g，无损失地放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火直至呈透明的蓝绿色，

5、然后再继续加热，至少2h。1.7.2氨的蒸馏1.7.2.1常量蒸馏法将试样消煮液冷却，加入60mL~80mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。然后小心地将凯氏烧瓶中加入50mL氢氧化钠，轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混合均匀后再加热蒸馏，直至流出体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1min~2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形内，然后停止蒸馏。1.7.2.2半微量蒸馏法将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半

6、微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硼酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10mL~20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。1.7.2.3.蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按7.2.1或

7、7.2.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19%±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。1.7.3滴定用7.2.1法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。1.8空白测定称取蔗糖0.5g，代替试样，按5测定步骤进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL。1.9分析结果的表述1.9.1计算见下式：粗蛋白质（%）=（V2—V1）×C×0.0140×6.25/m×V