环孢素A对糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子-β_1及E-钙黏素表达的影响.pdf

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1、中国药物与l笳床2014年6月第14卷第6期ChineseRemedies＆Clinics，』ne!!：!：鱼·739··基础研究·环孢素A对糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子一I3及E一钙黏素表达的影响张巍赵银娥周瑞君弓晓丽任小军糖尿病是一种常见的由内分泌系统代谢障碍引起的慢保存肾脏组织以备指标检测。性终身疾病。而糖尿病。肾病是其最严重的微血管病变之一。1．4肾脏组织病理学检查：4oC0．9％氯化钠注射液原位灌洗肾脏纤维化的基本病理改变是细胞外基质(ECM)的过度沉后迅速摘除双侧肾脏，去包膜，切取部分肾脏，0．9％氯化钠注积，进而取代了肾脏固有细胞，破坏肾脏正常结构。

2、转化生长射液冲洗后用中性甲醛水溶液固定，常规脱水、包埋，其余肾因子(TGF)一B是上皮细胞一问充质转分化(EMT)过程主要的脏组织液氮冻存，分别进行苏木素一伊红(HE)染色，Masson染促进因子和启动因子⋯，E．钙黏素是。肾小管上皮细胞特有的色：免疫组织化学检测：采用ABC法检测肾脏TGF．13以及标志物，参与了EMT的主要过程。本研究利用环孢素治疗链E一钙黏素表达变化。采用Image—ProPlus5．0对图像中的阳性脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠，观察环孢素对糖尿反应部位进行积分吸光度分析。病肾病大鼠肾组织TGF—B以及E一钙黏素表达，为免疫抑制1．5

3、实时荧光定量聚合酶链反应(RT—PCR)：留取大鼠各标剂治疗糖尿病肾病提供新的理论依据。本总RNAlg，合成cDNA第一链，行RT—PCR。TGF．p．反应1材料与方法条件为：95℃变性50s，57oC退火50S，72℃延伸1min，301．1实验材料：健康雄性Wistar大鼠30只，购于山西医科大个循环。E．钙黏素反应条件为：94℃变性50S，60℃退火50学动物实验中心，平均体质量200g，鼠龄8周；环孢素AS，72oC延伸1min，35个循环。扩增产物测序，采集琼脂糖电(CsA)购于华北制药集团有限公司；STZ购于美国Sigma公泳凝胶图像，计算mRNA相对表

4、达水平，扫描灰度记录。司：兔抗大鼠Smad2／3蛋白一抗和兔抗大鼠Ⅳ型胶原蛋白一1．6统计学分析：计量数据用+j表示，所有数据用抗(武汉博士德生物工程有限公司)；Trizol试剂(上海生工生SPSS17．0统计软件分析，多组均数间比较用单因素方差分物工程有限公司)；SABC试剂盒(北京博奥森生物技术有限析。P<0．05为差异有统计学意义。公司)；cDNA逆转录试剂盒(Fermentas公司)；SYBRI荧光2结果定量聚合酶链反应(PCR)试剂盒(美国Roche公司)；实时荧2．1实验大鼠的生化指标：实验干预4、8、12、16周后，测大光定量PCR所需引物由上海生合成

5、。鼠血糖、体质量、血肌酐及尿蛋白定量(24h)。DN组与CON1．2模型建立：将30只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组相比，大鼠24h尿蛋白明显增加，大鼠体质量减少，血肌酐组(CON组)、糖尿病肾病模型组(DN组)、环孢素A治疗组明显升高，差异有统计学意义(P<0．05)；CsA组与DN组相(CsA组)。DN组与CsA组大鼠禁食12h后一次性腹腔内注比，大鼠体质量增加，尿蛋白定量(24h)减少，血肌酐明显降射STZ(55mg／kg，溶于0．1mol／I的柠檬酸缓冲液中，pH4．5。低，差异有统计学意义(P<0．05)，见表1。浓度1％)，CON组仅注射等体积的

6、柠檬酸缓冲液。72h后，2．2肾脏病理变化：CON组肾脏结构正常．肾小球未见硬尾静脉取血，检测随机血糖≥16．7mmo]／L作为糖尿病动物模化，肾小管排列整齐；DN组肾小管排列紊乱、萎缩，。肾小管细型建立成功的标准。模型建成后4周，CsA组按3mg·kg_1．d胞破碎，小管细胞空泡变性，肾小动脉管壁增厚，管腔狭窄，灌胃给药，另2组均给予等量蒸馏水灌胃。系膜细胞及基质增生，问质中见炎细胞浸润；CsA组肾脏结1．3留取标本：各组大鼠同步饲养，每周监测体质量，每4周构较DN组有所改善，肾小管管壁增厚程度、管腔狭窄程度、监测血糖、丙氨酸转氨酶、总胆红素、肌酐、24h尿微量白

7、蛋系膜细胞及基质增生程度以及炎细胞浸润明显减轻。见图1。白水平。16周末腹主动脉采血测血糖及血肌酐。处死大鼠后，2．3免疫组织化学指标：@TGF-13：CON组肾小管上皮细胞蛋白表达偶见，DN组肾小管上皮细胞大量表达，CsA组肾小DOI：10．11655／zgywylc2014．06．010管上皮细胞表达量较DN组减少，差异有统计学意义(P<基金项目：山西省卫生厅科技攻关计划项目(2011005)；太原市0．05)。②E．钙黏素：CON组肾小管上皮细胞蛋白大量表达，DN科技局科技攻关项目(12016907)作者单位：046011长治医学院附属和济医院肾内科(张巍