幽门螺杆菌检测.ppt

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1、幽门螺杆菌感染的实验诊断讲课内容第一节幽门螺杆菌特点第二节幽门螺杆菌感染的检测方法第三节幽门螺杆菌检测方法的临床应用123第一节幽门螺杆菌特点幽门螺杆菌（Helicobacterpylori简称HP），呈弧形或S形，有1—2个微小弯曲，属微需氧菌，在pH值为6—8时繁殖最为活跃，该菌具有丰富的尿素酶，可分解食物中的尿素产生氨，该菌生长于胃粘液深层，胃粘膜表面，多在胃窦部以胃小凹、上皮皱褶的内折及腺腔内为多。H.Pylori感染和十二指肠溃疡H.Pylori感染D/G细胞功能改变遗传易感性↑壁细胞总体增加B型慢性胃窦炎↑胃泌素胃酸分泌量H.Pylori的迁移十二

2、指肠粘膜胃上皮化生十二指肠球炎十二指肠球溃疡H.Pylori感染和胃癌的关系浅表性胃炎正常胃粘膜基因损伤H.Pylori感染弥漫性胃癌萎缩性胃炎环境因素胃粘膜肠上皮化生高CagA+-HP滴度宿主因素的H.pylori菌株感染肠型早期胃癌进展期胃癌3.HP的毒力作用取决于①定植能力②菌株的基因型③细菌的圆球体样型态④对抗菌药物的敏感性第二节幽门螺杆菌感染的检测侵入性检测方法非侵入性检测方法快速尿素酶试验病理切片染色培养黏膜涂片革兰氏染色基因方法:PCR等13C-或14C-尿素呼气试验Hp粪便抗原试验Hp血清抗体试验试验原理HP能产生丰富尿素酶，将尿素分解、产生2

3、个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。操作过程活检同时取2块组织进行检测（胃窦和胃体各1块），标本放置于试剂后观察颜色变化。注意事项检测结果受试剂pH值、取材部位、组织大小、细菌量、观察时间、环境温度等因素影响（一）快速尿素酶试验RUT一、创伤性检查胃镜检查胃黏膜取材,直接涂片革兰氏染色，也可包埋切片，常规HE染色或银染，直接镜检观察Hp。直接镜检（二）组织学检查1.免疫组化染色特异性高。2.HE染色可同时作病理诊断；3.荧光原位杂交（FISH）具有较高敏感性1.在胃镜取胃粘膜放在转运培养基中。2.接种于Hp牛脑浸液培养基，分区划线。3.置5-12％CO

4、2培养箱35-37℃，3-5d形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶血环。培养过程诊断Hp最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验的“金标准”。一般用于药敏试验和科研。（三）细菌培养幽门螺杆菌的尿素酶(A、B、C、D)基因、16S-rDNA基因、VacA及CagA基因均已克隆成功，根据幽门螺杆菌不同的耙基因，设计不同的引物，从而建立不同的PCR系统，扩增产物可经凝胶电泳分析.原理与方法（四）聚合酶链反应试验(PCR检测技术)1.与细菌培养和组织学染色镜检比较无明显优越性。2.现在可收集胃液PCR检测幽门螺杆菌敏感性高，但可能与口腔和胃内其它尿素酶阳性菌丛起交叉反应注

5、：HP的基因分型（HP菌属亚群）及致病性分布比例VacA基因CacA基因致病性Ⅰ型56%++胃炎、十二指肠溃疡、胃癌Ⅱ型16%--胃炎中间表达型28%+/-+/-VacA基因表达空泡毒素87KDCagA基因表达细胞毒素相关蛋白128KDCagA基因仅出现于VacA产生细胞毒效应时，是VacA产生效果的标志原理和过程HP能产生丰富尿素酶，能分解胃中的尿素，当整粒摄入含同位素碳-13的尿素胶囊后，碳-13尿素在尿素酶作用下，分解为氨和碳-13—二氧化碳，碳-13—二氧化碳被小肠上段吸收后，进入血循环，并随呼气排出，分析呼气中的碳-13就可诊断该细菌的存在特点和注意

6、事项1.易于操作；可反映全胃Hp感染状况。2.检测前一个周内应停用抗生素、铋剂、质子泵抑制剂等药。3.孕妇、哺乳期妇女及儿童不宜做。（一）13C-或14C-尿素呼气试验二、非创伤性检查多采用ELISA双抗体夹心法，或胶体金试条法。留取晨粪便，用稀释液稀释，再加入试条或微孔板检测。原理与方法（二）幽门螺杆菌粪便抗原检测1.粪便抗原检测灵敏度高、准确性好，HP死亡但抗原成分仍保留下来，故在治疗前后都可用。2.适用于所有年龄和类型的患者（儿童）。多采用ELISA双抗原夹心法，或胶体金试条法。可快速检测人血清、血浆或全血中幽门螺杆菌抗体。原理与方法（三）幽门螺杆菌血清

7、抗体检测1.检测的抗体是IgG，反映一段时间内Hp感染情况，部分试剂盒可同时检测CagA和VacA抗体。2.主要适用于流行病学调查。第三节幽门螺杆菌检测方法的临床应用小结：几种HP检测方法的比较方法粪便HP抗原检测快速尿素酶试验组织培养银染法血清抗体检C-尿素呼吸试验用途粪便HP抗原检测胃粘膜活组织中HP引起的尿素酶活性化检查胃粘膜活组织中的HP检查胃粘膜组织切片中的HP检测血清或血浆中HP感染引起的IgG检测HP的尿素酶活性样本粪便胃或十二指肠活检组织胃或十二指肠活检组织胃或十二指肠活检组织血清或血浆口服13C-尿素方法酶免疫法PH值变化组织培养组织切片染色

8、法酶免疫法气相色谱/质谱设备或技要求实