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1、免疫学检测技术及应用吕昌龙免疫学教研室免疫学检测技术应用：1.疾病的诊断、治疗效果评价及发病机理探讨：如：感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反应、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反应、肿瘤等2.免疫分子的定性、定量测定：如：细胞因子、粘附分子、细胞受体、补体、抗体等3.抗原物质的定性、定量检测：如：病原微生物及其代谢产物，组织细胞、蛋白质等4.免疫细胞的分离、鉴定及功能测定：如：T细胞及其亚群等抗原－抗体反应抗原与相应抗体在体内或体外相遇可发生特异性结合，呈现的某种反应现象。抗原抗体反应有以下几个特点:1.抗原与抗体结合是特异性结合表位(抗原)——超变区
2、(抗体)2.抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合氢键、疏水键、静电引力和范德华力(Vanderwaal‘sforce)、电子云力的合力。抗原和抗体可解离,性质不变。3.抗原抗体反应可分为两个阶段（1）特异性结合阶段此阶段需时短,仅需几秒到几分钟,无可见反应出现（2）可见反应阶段需时较长,数分,数小时或数日出现可见现象,表现为沉淀,凝集,细胞溶解等4.抗原和抗体结合是否呈现明显可见的反应现象,与两者的分子比例密切相关抗原抗体反应的主要影响因素：1.电解质:在中性或碱性条件下,抗原抗体均带负电荷,适当浓度的电解质会使它们失去一部分负电荷而互相结合,出现
3、明显的沉淀或凝集现象。2.温度:37℃3.酸碱度:pH6-8抗原抗体反应包括：沉淀反应凝集反应溶解反应补体结合反应中和反应已知抗体检测未知抗原；已知抗原检测未知抗体。Sensitivityofvariorimmunoassays一、沉淀反应(precipitation)可溶性抗原与相应抗体在电解质存在条件下结合，出现沉淀物的现象。沉淀反应的试验方法：环状法絮状法琼脂中沉淀法琼脂中沉淀反应法：双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)单向免疫扩散(singleradialimmunodiffusion)对流免疫电泳(counterim
4、munoelectrophoresis)火箭电泳(rocketelectrophoresis)免疫电泳(immunoelectrophoresis)二、凝集反应(agglutination)颗粒性抗原或吸附于颗粒上的可溶性抗原(或抗体)于相应抗体(或抗原)，在电解质存在下出现凝集物的现象。凝集反应包括：◆直接凝集反应(directagglutination)◆间接(被动)凝集反应(indirect/passiveagglutination)◆间接凝集抑制试验(indirectagglutinationinhibitiontest)◆协同凝集试验(c
5、oagglutinationtest)◆抗球蛋白试验(antiglobulintest，Coomb’stest)三.免疫标记技术用荧光素、同位素、酶及发光等示踪物质标记抗体(或抗原)，与抗原(或抗体)进行反应，通过检测示踪物质，分析被检抗原(或抗体)的存在或含量的方法。灵敏度：高，1X10-4～1X10-5ug抗体/ml应用：微量物质的定性、定量或定位。免疫标记技术的基本类型：（一）免疫荧光技术(immunofluorescencetechnique)（二）免疫酶技术(immunoenzymatictechnique)（三）同位素标记技术(isot
6、opelabellingtechnique)（四）发光免疫测定(luminescentimmuno-assay,LIA)（五）免疫胶体金标记技术(colloidalgold／immunogoldstaining)（一）免疫荧光技术(又称荧光抗体技术)原理：用荧光素(如异硫氰酸荧光素、罗丹明B200等)标记抗体(荧光抗体)，用荧光抗体浸染细胞或组织切片，抗原与荧光抗体结合，于荧光显微镜下观察荧光，确定被检抗原的存在。免疫荧光技术包括：直接法间接法间接补体增强法Directandindirectimmunofluore-scencestainingof
7、membraneantigen(mAg).（二）免疫酶技术(immunoenzymatictechniques)是将抗原抗体反应与酶催化底物的作用相结合的一种方法。主要有两种类型：1.免疫酶染色2.酶免疫测定（enzymeimmunoassay,EIA）1.免疫酶染色(又称免疫组化技术,immunohistochemistrytechnique)原理：用酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)标记抗体(酶标抗体)，将酶标抗体与抗原(细胞或组织切片)作用，抗原与酶标记抗体结合，加底物，酶催化底物产生有色物质，观察结果。应用：细胞内、组织内抗原的定性、定量
8、和定位检测。2.酶免疫测定酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)原理
