组织培养基本技术与基本知识.doc

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1、组织培养基本技术与基本知识2005.10.15目录前言------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------5第一章基本技术---------------------------------------------------------------------------------------------------6第一节原代细胞单层静止培养的设备与器材准备-------------

2、-------------------------------------------------6一、设备与器材二、器材的清洗第二节原代细胞单层旋转瓶培养的设备与器材准备------------------------------------------------------11一、设备与器材二、器材的清洗第三节组织培养用水的制备和各种溶液的配制----------------------------------------------------------12一、水（双蒸水、三蒸水或去离子水）二、汉克氏（Hanks）原液和汉克氏液三、0.5%水解乳蛋白----汉克

3、氏液（简称乳汉液）的配制四、7.5%的碳酸氢钠（NaHCO3）配制五、胰蛋白酶的配制六、犊牛血清的制备七、每毫升含1万单位双抗（青霉素与链霉素）的配制八、每毫升5万单位制霉菌素的配制九、营养液与维液的配制第四节器物与溶液的包装、灭菌和无菌操作-------------------------------------------------------------16一、包装与灭菌二、无菌操作第五节无菌检验-------------------------------------------------------------------------------------

4、--------------23第六节原代单层细胞的制备------------------------------------------------------------------------------------24第七节细胞计数和染色------------------------------------------------------------------------------------------26一、细胞计数二、细胞染色第八节培养细胞的观察---------------------------------------------------

5、------------------------------------27一、培养细胞的生长和繁殖二、在单层细胞培养中细胞的形态观察第九节原代单层细胞培养中应注意的问题------------------------------------------------------------------29一、应注意的问题二、可能会出现的问题第一章在组织培养的细胞中病毒的接种与毒价的滴定（测定）--------------------------------------31第一节在组织培养的细胞上病毒的接种方法--------------------------------

6、------------------------------32一、用敏感细胞分离病毒二、病毒在敏感细胞中的传代三、接种后细胞病变（CPE）的观察与判定标准第二节在组织培养细胞中病毒毒价的测定----------------------------------------------------------------34一、病毒毒价测定操作方法二、半数细胞病变终点（TCID50）计算第二章基本知识----------------------------------------------------------------------------------------

7、---------41第一节影响离体细胞生长繁殖的一些因素-----------------------------------------------------------------41一、温度二、氢离子浓度三、水四、渗透压与无机盐类A、细胞所需无机盐离子的作用B、无机盐类对平衡渗透压和维持pH的作用五、气体六、细胞接种浓度七、容器转动速度第二节细胞的营养物质----------------------------------------------------------------------------------