DB32∕T 1848-2011 水稻转基因实验室安全操作规程.pdf

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1、ICS65.020.01B09备案号：31248-2011DB32江苏省地方标准DB32/T1848—2011水稻转基因实验室安全操作规程RulesofLab-safetyOperationfortheEngineeringGeneTransformationinRice2011-08-15发布2011-10-15实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T1848—2011前言水稻是重要的粮食作物。转基因技术可用于水稻的遗传改良。水稻转基因的实验室安全操作目前尚无国家标准、行业标准。随着国内外稻米市场质量安全准入制度的实施，为规范水稻转基

2、因实验室安全操作技术，保证转基因技术应用的生物与环境安全，特制定本标准。本标准按GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准结构和编制》的要求编写。本标准技术指标符合如下标准的有关规定：GB/T19495.2—2004转基因产品检测实验室技术要求SN/T1834—2006出入境口岸疾病监测实验室生物安全操作标准本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏农业科学院粮食作物研究所。本标准主要起草人：杨杰、仲维功、范方军、陈志德、王军。IDB32/T1848—2011水稻转基因实验室安全操作规程1范围本标准规定了安全等级为I

3、级的转基因水稻实验室安全操作标准。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本部分。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本部分。GB/T19495.2—2004转基因产品检测实验室技术要求。SN/T1834—2006出入境口岸疾病监测实验室生物安全操作标准。3术语和定义3.1生物安全Biologicalsafety避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施。3.2转基因技术Transgenetechnology将人工分离和修饰过的基

4、因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰。3.3聚合酶链式反应Polymerasereaction模板DNA先经高温变性为单链，在DNA聚合酶和适宜的温度下，两条引物分别与模板DNA两条链上的一段互补序列发生退火，接着在DNA聚合酶的催化下以四种dNTP为底物，使退火引物得以延伸，如此反复变性、退火和DNA合成这一循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增。4水稻转基因过程4.1农杆菌介导转化法将目的基因插入到经过改造的T-DNA区——借助农杆菌的感染实现外源基因向水稻细胞的转移与整合——通

5、过细胞和组织培养技术，再生出转基因水稻。4.2基因枪介导转化法1DB32/T1848—2011利用基因枪将带目的基因的DNA溶液送入完整的水稻组织和细胞中——细胞和组织培养技术，再生出水稻植株——选出转基因阳性水稻植株，即为转基因植株。5水稻转基因实验室安全基本操作技术5.1实验仪器安全操作5.1.1离心机的安全操作使用实验室离心机时，应仔细检查使仪器的机械性能处于正常状态。离心机放置的高度应使工作人员能够看到离心机内部，以正确放置十字轴和离心桶。离心管和盛放离心标本的容器应由厚壁玻璃（塑料）制品制成，并且在使用前应检查有无破损。离心的

6、试管和标本容器应用螺旋盖牢固盖紧。离心桶的装载、平衡、密封和打开应在生物安全柜内进行。离心桶和十字轴应按质量配对，并在装载离心管后正确平衡。操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。空离心桶应用蒸馏水或乙醇（异丙醇，70%）平衡。禁止使用盐酸溶液或次氯酸钠溶液平衡。使用固定角离心转子时，离心管不能装的过满，以防漏液。应检查离心机内转子部位的腔壁有无被污染。应检查离心转子和离心桶腐蚀或细微裂痕。每次使用后，应清除离心桶、转子和离心机腔的污染。使用后应将离心桶倒置存放使平衡液流干。使用牢固加盖的离心管，防止感染性气溶胶和可扩散粒子

7、的产生。5.1.2匀浆器、摇床、搅拌器和超声处理器的安全操作应使用实验室专用搅拌器和消化器。盖子、杯子或瓶子应保持正常状态，无裂缝或变形。盖子应能封盖严密，衬垫应处于正常状态。应使用塑料容器，聚四氟乙烯容器。避免含有感染性物质的气溶胶从盖子和容器间隙逸出（玻璃破碎而释放感染性物质，伤害操作者）。使用匀浆器、摇床和超声处理器时，应采用结实透明的塑料箱覆盖。操作结束后，应在生物安全柜内打开容器。对使用超声处理器的人员应提供听力保护。5.1.3电泳系统确定电泳仪的电源开关处于关闭的状态。连接电源线，确定电源插座有接地保护。将黑红两种颜色的电极

8、线对应插入仪器输出插口，并与电泳槽相同颜色插口连接好。确定电泳槽中的试剂配置是否符合要求。打开开关，根据实验需求调节电流或电压。在电泳进行期间，避免身体和电泳液接触，以免触电。如发现异常情况（如出现异味），