HE Masson实验步骤及分析方法.doc

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1、HE染色1.烤片机60-70℃，烤片20min2.脱蜡至水。二甲苯I、II、III每缸10min，梯度酒精（无水、无水、90%、80%）每缸5min，tapwaterordH2O流水冲洗，擦净玻片。3.苏木素滴染5-10min，tapwaterordH2O流水冲洗。4.浸入95%酒精30-60s后取出勿擦，滴染伊红3-5min。5.脱水。75%酒精-90%酒精-95%酒精-无水酒精-无水酒精依次涮一涮，最后一个无水酒精3min。二甲苯I、II每缸5min6.封片。待残余二甲苯挥发，中性树胶封片。分析方法：1.拍照。40×物镜下选取含有圆形或近似圆形细胞的

2、视野拍照，拍照张数依组织大小和HE染色结果而定，但应确保含有足够的细胞数。2.定标。在同一显微镜下拍测微尺，算得40×物镜下90pixels=10um。打开ImageJ—Open—Analyse—SetScale—SetMeasurement—Freehandselections—圈目标细胞—Analyse—Measure—Analyse—Label—保存带标记的图片。3.测量。选择含有细胞核的、圆形或近似圆形的细胞，用ImageJ测量细胞大小。每块组织至少选取60个细胞。最后求Area的平均值。Masson染色1.烤片机60-70℃，烤片20min2.

3、脱蜡至水。二甲苯I、II、III每缸10min，梯度酒精（无水、无水、90%、80%）每缸5min，tapwaterordH2O流水冲洗。3.Bouin液固定。用事先60℃预热15min的Bouin液固定1h，dH2O冲洗5min。4.含铁苏木素A、B各20ml（等体积混合），5min，dH2O冲洗5min，再用去离子水冲洗数次。5.滴染碱性品红5min，去离子水冲洗数次。6.Mix磷钨酸10ml、磷钼酸10ml、去离子水20ml，5min。切勿冲洗。7.滴染苯胺蓝5min，去离子水冲洗数次。8.脱水。75%酒精-90%酒精-95%酒精-无水酒精-无水酒

4、精依次涮一涮，最后一个无水酒精3min。二甲苯I、II每缸5min。9.封片。待残余二甲苯挥发，中性树胶封片。分析方法：1.拍照。20×物镜下地毯式拍照，使照片全部覆盖组织块。2.测量Area%。打开ImageJ—Open—Analyse—SetMeasurements—Image—Type—RGBStack—Image—Adjust—Threshold—参考原始图片调节第二条使蓝染部分充分显现Analyse—Measure。3.所有照片测量完毕后，求Area%的平均值。拍照和分析同一人完成，确保所有照片背景色相同，减小测量误差。（注：举例图片为HE染色

5、）