人教版生物选修3现代生物科技专题专题1基因工程1.2基因工程的基本操作程序.ppt

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1、若使大肠杆菌通过基因工程改造能够产生人的生长激素，大致要经过哪几个过程？1.2基因工程的基本操作程序一、目的基因的获取二、基因表达载体的构建三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取编码蛋白质的结构基因具有调控作用的因子获取方法：1、从基因文库中获取目的基因2、利用PCR技术扩增目的基因3、化学方法人工合成1、从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因文库基因组文库部分基因文库某生物

2、体内全部DNA许多DNA片段受体菌群体1、从基因文库中获取目的基因限制酶与运载体连接导入基因组文库某种生物某个时期的mRNAcDNA反转录受体菌群体与运载体连接导入部分基因文库（cDNA文库）2、利用PCR技术扩增目的基因聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。循环变性退火延伸生物材料DNA目的基因的获取mRNAcDNAPCR反转录cDNA文库DNA一定大小范围的DNA基因组文库人工合成限制酶切二、基因表达载体的构建——核心质粒DNA分子限制酶处理两个切口获得目的

3、基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口两个黏性末端1.已知核苷酸序列，基因较小a.从基因文库中获取条件方法2.已知核苷酸序列,或部分序列,基因较大3.核苷酸序列未知，无mRNA4.已知相关基因对应的mRNAb.从基因文库中获取或PCRc.从cDNA文库中获取或逆转录后PCRd.人工直接合成三、将目的基因导入受体细胞转化常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。三、将目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入

4、植物细胞转化农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法三、将目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞转化农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法2.将目的基因导入动物细胞显微注射技术提纯基因表达载体体外显微注射入受精卵受精卵移植三、将目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞转化农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法2.将目的基因导入动物细胞显微注射技术3.将目的基因导入微生物细胞Ca2+处理四、目的基因的检测与鉴定检测—鉴定——①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目

5、的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等DNA分子杂交分子杂交（注意与上不同之处）抗原—抗体杂交基因工程的基本操作程序目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定1、从基因文库中获取目的基因2、利用PCR技术扩增目的基因3、化学方法人工合成复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射法、Ca2+处理法DNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原—抗体杂交技术分子检测外的个体水平鉴定