猪的常见寄生虫病课件.ppt

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1、第二节免疫学诊断方法已报道的寄生虫免疫学诊断方法很多，包括变态反应、沉淀反应、凝集反应、补体结合试验，免疫荧光抗体技术、免疫酶技术、放射免疫分析技术、免疫印迹技术等。此处仅介绍主要几种一、间接血凝试验1.基本原理间接血凝试验(Indirectheamagglutinationassay，IHA)是凝集试验的一种。抗原与相应抗体结合形成复合物，在电解质存在下，复合物相互凝集形成肉眼可见的凝集小块或沉淀物。根据是否产生凝集现象来判定相应抗原或抗体，称为凝集试验。颗粒性抗原与抗体直接结合后出现的凝集现象，称直接凝集试验。将可溶性抗原或抗体先吸附于一种与免疫无关的，一定大小

2、的载体颗粒表面，然后与相应抗体或抗原作用，在适宜的条件下由于抗原抗体的特异性结合，会带动载体颗粒的凝集，出现肉眼可见的凝集现象，称间接凝集试验。常用的载体颗粒有红细胞（“O”型人红细胞，羊红细胞），聚苯乙烯胶乳颗粒，白陶土，离子交换树脂，火棉胶等。以红细胞为载体时，就称作间接血凝试验2.间接血凝试验的种类间接血凝试验(IHA)先将抗原吸附于红细胞表面，以检测标本中的抗体。将抗原或抗体吸附于红细胞表面的过程，称致敏。吸附有抗原或抗体的红细胞称致敏红细胞反向间接凝试验(RIHA)用特异性抗体致敏红细胞，以检测标本中的抗原间接血凝抑制试验(IHAI)该试验用抗原致敏的红细

3、胞来检测相应的抗原。方法是先在被检样本中加入相应抗体，作用一段时间后再加入致敏红细胞。如标本中含有相应的抗原，则抗原将先与抗体结合，再加入抗原致敏的红细胞后则不出现凝集。若标本中不存在抗原，则出现凝集反向间接血凝抑制试验(RIHAI)该试验用抗体致敏的红细胞检测标本中的抗体。方法为先在待检样本中加入相应抗原，作用一段时间后再加入致敏红细胞。若标本中含有相应抗体，则不出现凝集，若不含抗体，则出现凝集3.间接血凝技术的优缺点IHA已广泛用于寄生虫病的诊断和流行病学调查，有较高的敏感性和一定的特异性，如对日本血吸虫病的诊断，阳性检出率可达91.9~100%，假阳性为0.7

4、~3.2%致敏红细胞冷冻干燥后，在4℃可保存1~2年，所用器材简单，国内均已生产。且方法简便快速，便于基层单位使用缺点是不同实验室制备的红细胞和不同批号制品，其敏感性和特异性可能不一致，因此试剂制品需标准化和商品化。另外还存在一定的非特异性反应，这与致敏红细胞的质量优劣有关。必要时可用血凝抑制试验来排除非特异性反应二、免疫荧光技术免疫荧光技术(Immunofluorescencemethod)又称荧光抗体标记技术(Fluorescent-labelledantiboolytechnique)，是指用荧光素对抗体或抗原进行标记，然后用荧光显微镜观察所标记的荧光以分析示

5、踪相应的抗原或抗体的方法1.荧光色素某些物质在光的照射下吸收光能进入激发状态，而从原来的激发状态回到原来的基态时，能够从电磁辐射形式放射出所吸收的光能，这种现象叫光致发光。在光致发光现象中，如果用一波长较短的光(如紫外光)照射某种物质时，这种物质在极短的时间内能发射出波长较照射光波长为长的光(如可见光)，这种光称荧光。能产生荧光的物质称为荧光色素或荧光素。荧光色素种类很多。用于标记抗体的荧光色素必须具有下列条件①能与免疫球蛋白共价结合，结合物稳定②结合后不影响免疫球蛋白免疫活性，同时荧光效率无明显影响③标记方法简单、迅速、安全无毒目前最常用的荧光色素有以下三种异硫氰

6、酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，FITC)为黄色结晶形粉末，分子量为389，呈明亮的黄绿色荧光，是最常用的一种四乙基罗丹明(lissaminerhodamineB200，RB200)为褐红色粉末，呈明亮的橙色荧光。本品为碘酸钠盐(-SO3Na)，不能直接与蛋白质结合，需在五氯化磷作用下转化为碘氯(-SO2Cl)才能与蛋白质结合四甲基异硫氰基罗丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate，TRITC)为紫红色粉末，荧光呈橙红色，与FITC的荧光对比清晰，且其本身含有异硫氰基(NCS)，易与蛋白质结合，比RB2

7、00使用方便，近年来已较多地应用于双标记工作观察时，首先点燃高压汞灯5~10分钟后调节暗视野，观察标本。每次观察时间不宜超过2小时，否则影响高压汞灯的寿命，并且发光强度减弱。判定结果时，一为无荧光，二为极弱的可疑荧光，+荧光弱但清楚可见，++荧光明亮，+++~++++荧光强而明亮。目前使用的荧光显微镜一般均带有自动摄影装置。需摄影时，由于荧光摄影时间长，故应用快速感光胶卷，以24~29DIN为宜目前，荧光免疫技术已在许多寄生虫病中得到应用。如血吸虫病、锥虫病、旋毛虫病、弓形虫病、利什曼病等三、免疫酶技术1.基本原理免疫酶技术是继免疫荧光技术之后发展起来的又一种免