色谱法导论2012s课件.ppt

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1、第十五章色谱法导论Chromatography色谱法是一种重要的分离分析方法，它是根据组分在两相中作用能力的不同而达到分离目的。§15.1概述ts1、色谱法的由来：1903年：茨维特（俄）分离植物色素；植物叶子萃取物充有碳酸钙的玻璃管加入石油醚色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。一、色谱法简介Tsweet的实验2、基本术语：固定相：填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）。流动相：自上而下运动的一相（一般是气体、液体或超临界流体）。色谱柱：装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）。3、色谱分离原理利用不同物质在流动相和固定相中具有不

2、同的分配系数，当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生相互作用，这些组分在两相间进行反复多次分配，原来微小的分配差异产生了很明显的分离效果，不同组分在固定相中滞留时间长短不同，从而依先后顺序流出色谱柱。二、色谱法的分类：1、按两相物理状态分类按流动相分按固定相分气相色谱（GC）液相色谱（LC）超临界流体色谱（SFC）气固色谱（GSC）气液色谱（GLC）液固色谱（LSC）液液色谱（LLC）2、按固定相的形式分类按固定相在支持体中的形状分柱色谱平板色谱纸色谱薄层色谱毛细管柱色谱法填充柱色谱法3、按分离过程的化学原理分类吸附色谱法：利用组分在

3、吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法。分配色谱法：利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法。离子交换色谱法：利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法。凝胶色谱法亲和色谱法三、色谱法的特点1.分离效率高2.灵敏度高3.分析速度快4.应用范围广5.被分离组分的定性较为困难§15.2色谱基本概念一、色谱分离过程混合物样品（A+B）→色谱柱中分离→检测器→记录下来。组分从色谱柱流出时，各个组分在检测器上所产生的信号随时间变化，所形成的曲线叫色谱图。记录了各个组分流出色谱柱的情况，又叫色谱流出曲线二、色

4、谱常用术语1、色谱流出曲线和色谱峰：由检测器输出的电信号强度对时间作图，所得曲线称为色谱流出曲线。曲线上突起部分就是色谱峰。如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线（气固吸附色谱）或分配等温线（气液分配色谱）的线性范围内，则色谱峰是对称的。2、基线—在实验操作条件下，色谱柱中只有流动相通过（没有组分流出时）的曲线叫基线。稳定情况下：一条水平直线。基线上下波动称为噪音。3、色谱峰的高度h峰高h—色谱峰最高点与基线之间的距离，可用mm，mV，mA表示。峰的高低与组分浓度有关，峰越高越窄越好。hσ4.色谱峰的宽度标准偏差σ——峰高0.607倍处的色谱峰宽

5、的一半。峰底宽Wb——色谱峰两侧拐点所作切线在基线上的距离Wb=4σ半峰宽W1/2——峰高一半处色谱峰的宽度W1/2=2.354σW1/2=0.589WbWb5.色谱峰面积A——色谱峰与峰底所围的面积。对于对称的色谱峰A=1.065hW1/2对于非对称的色谱峰A=1.065h(W0.15+W0.85)/26.色谱保留值——定性的依据t0（1）死时间t0——不被固定相吸附或溶解的组分流经色谱柱所需的时间。从进样开始到柱后出现峰最大值所需的时间。气相色谱—惰性气体（空气、甲烷等）流出色谱柱所需的时间。(2)保留时间tR———组分流经色谱柱时所需时间。

6、进样开始到柱后出现最大值时所需的时间。操作条件不变时，一种组分对应有一个tR定值。（3）调整保留时间t’R扣除了死时间的保留时间。t’R=tR-t0t’R体现的是组分在柱中被吸附或溶解的实际时间。t’R保留值用体积表示：（4）死体积V0—不被固定相滞留的组分流经色谱柱所消耗的流动相体积称死体积，色谱柱中载气所占的体积。V0=t0F0F0为柱后出口处流动相的体积流速mL/min（5）保留体积VR—组分从进样开始到色谱柱后出现最大值时所需流动相体积，组分通过色谱柱时所需流动相体积。VR=tRF0（6）调整保留体积V’R—扣除了死体积的保留体积，真实的

7、将待测组分从固定相中携带出柱子所需的流动相体积。V’R=t’RF0V0、t0与被测组分无关，因而V’R、t’R更合理地反映了物质在柱中的保留情况。（7）相对保留值γ2，1或γi,s—在相同操作条件下，组分2或组分i对另一参比组分1或s调整保留值之比（8）保留指数：是一种重现性较好的定性参数规定正构烷烃保留指数为分子中碳原子个数乘以100，如正己烷、正庚烷的保留指数分别为600和700。被测物质的保留指数Ix可采用两个相邻正构烷烃的保留指数进行测定将碳数为n和n+1的正构烷烃加到被测物质x中进行色谱分析，测得它们的保留值保留指数计算方法n）tR(n

8、+1)通大　　學由色谱流出曲线，可以看出：(i)根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组分的最少个数；(ii)根据色谱峰的保留值，可以进行