实验四甘油三酯测定(范玉平).ppt

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1、生化分析相关概念准确度为一次测量结果与被测量的真值之间的一致程度。准确度是一个定性的概念，用于定性描述，如谈准确度高、低，是否合格。测量误差:是测量结果减真值之差。误差和准确度属于不同概念，两者之间不能划等号。不准确度的数字表达是不确定度(标准差和置信区间的半宽度表示)。可以理解为测量结果与约定真值之差的范围。生化分析相关概念正确度大量测量的均值与真值的接近程度。用偏倚表示不正确度。偏倚值(Bias=Xi-x),生化分析相关概念精密度：表示测量结果中的随机误差大小的程度，即指在一定条件下进行多次测定时，所得结果之间

2、的符合程度。常用标准差或变异系数表示。生化分析相关概念实验方法分类①决定性方法（definitivemethod）②参考方法（referencemethod）③常规方法（routinemethod）①决定性方法（definitivemethod）是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，测定结果为“确定值”，与“真值”最接近。由于技术要求太高，费用昂贵，用途：一级标准品定值；参考方法评价(一般不用于常规工作)②参考方法（referencemethod）是指准确度

3、与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性、直线性及较宽的分析范围。此类方法在条件优越的实验室中应经常使用。但它主要应用于鉴定常规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可以被接受。用途：它也用于二级标准品定值，也可用于评价商品试剂盒等。(有条件实验室可用于常规工作)③常规方法（routinemethod）有足够的精密度、准确性、特异性和适当分析范围。用途：经方法评估和学术组织认可后推荐为常规方法。例如：TG定量决定性方法——同位素稀释

4、/质谱（ID/GC/MS）参考方法——酶法常规方法——酶法实验方法选择原则①实用性：速度快、标本用量少、操作简便、安全可行。②可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性均达到要求。血清三酰甘油测定实验四实验目的:1.掌握酶法测定血清中三酰甘油的原理和意义．2.了解三酰甘油的正常值范围.一，血清甘油三酯/三酰甘油（TG），是一项重要的临床血脂常规测定指标，特别是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危险因素日益受到重视。TG的生物化学TG的生物化学二TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和1分

5、子甘油酯化而成，是体内能量的主要来源。TG处于脂蛋白的核心，在血中以脂蛋白形式运输。除TG外，外周血中还存在甘油二酯、甘油一酯（两者总和不足TG的3%）和游离甘油（FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL）及其残粒中，TG含量高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL），也称残粒样脂蛋白（RLP）TG的代谢外源性途径内源性途径外源性途径：指食物中的TG在小肠内水解成脂肪酸和甘油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入细胞，再合成TG并与其他脂质形成CM，通过淋巴系统入血。CM中的TG在脂蛋白脂肪酶（LPL）作用下

6、水解为甘油和游离脂肪酸（FFA），被细胞利用或贮存。内源性途径：CM水解产物—CM残粒以受体介导的形式被肝脏吸收，其衍生物和一些新组分合成VLDL。TG测定的方法学化学法色谱法酶法化学法化学法用有机溶剂氯仿抽提标本中的TG，去除抽提液中磷脂等干扰物后，用碱水解（皂化）TG，以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应测甲醛。但因操作步骤繁多、技术要求高、不能自动化，而不适于常规工作应用。化学法1.VanHandel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸-变色酸法）比较准确2.分溶抽提-乙酰丙酮显色法比较简便，条件温和，但灵

7、敏度低基本步骤：抽提、皂化、氧化、显色色谱法核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS）主要用作参考系统中决定性方法的建立及参考物质的制备与定值，此法费用昂贵，样品处理复杂，难以推广应用。酶法1.磷酸甘油氧化酶法最为普遍使用酶试剂稳定，灵敏度高，线性范围宽2.乳酸脱氢酶法结果准确，但灵敏度低，试剂不太稳定3.甘油氧化酶法磷酸甘油氧化酶法实验原理:TG+H2O甘油+FFA甘油-3-磷酸+ADPLPLGK甘油+ATP甘油-3-磷酸+O2GPO磷酸二羟丙酮+H2O2H2O2+4-AAP+DHBSPOD醌亚胺+H2O实

8、验操作(手工分析）:加入物空白管标准管样本管蒸馏水（ul）20————标准液（ul）——20——样本（ul）————20酶工作液（ml)1.51.51.5混匀，37℃孵育15min，以空白管调零，520nm波长处测定各管吸光度值(A)。酶工作液试剂1（稀释液）过氧化物酶EDTA4-氨基安替比林缓冲剂试剂2（酶试剂）脂蛋白脂酶ATPEDTA甘油激酶甘油磷酸氧化