肥达试验和沉淀反应实验报告.doc

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1、实验报告实验名称肥达试验实验日期院系专业班级姓名学号一、实验目的学会肥达反应的原理、方法以及结果分析。理解肥达反应在伤寒和副伤寒杆菌感染检测中的应用。二、实验器材试剂：生理盐水、患者血清、伤寒杆菌H菌液、伤寒杆菌O菌液、甲型副伤寒杆菌H液、乙型副伤寒杆菌H菌液器材：水浴锅、冰箱、小试管32支、试管架、记号笔、移液枪三、实验原理1.伤寒杆菌有三种抗原：分别为菌体抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）、体表抗原（Vi抗原）。其中以O抗原及H抗原的抗原性较强，而Vi抗原的抗原性不强，且相应抗体效价低且为时短暂，随细菌的消除而消失，故不列为肥达试验的检测项目。（但其检查有助于发现伤寒带菌者。）当抗原遇到特

2、异性抗体（抗O及抗H）时，便会发生凝集反应，通过对凝集物量多少来推算病人体内抗体的多少，以协助诊断、治疗及判断预后。2.用已知的伤寒沙门菌菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。四、实验过程及步骤1.取清洁小试管32支，分成4排，每排8支，依次编号。2.32支小试管，用移液枪各注入0.5ml生理盐水。3.第一管内加入1：10稀释的患者血清0.5ml，用1ml吸管吹吸三次，混匀，吸出0.5ml注入第二管作对倍稀释，……依次稀释至第7管，弃去0.5ml，第8管为对照

3、。第二排、第三排、第四排以相同步骤加入患者血清。4.第一排各管内注入伤寒杆菌H菌液0.5ml；第二排各管注入伤寒杆菌O菌液0.5ml；第三排各加入甲型副作寒杆菌H液0.5ml；第四排各管加入乙型副伤寒杆菌H菌液0.5ml。5.置于56℃水浴箱2~4小时。6.放冰箱过夜或放37℃水浴箱18小时后观察结果。7.结果观察最强:上液澄清，细菌全部凝集沉淀于管底。强：上液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。弱：上液混浊，细菌少部分凝集。不凝：液体呈乳状与对照管相同。五、实验总结1.结果与分析：先观察对照管，正确结果应无凝集现象，再观察各试验管的凝集现象，凝集程度以“+”多少表示之。（+++）最强，上液澄

4、清，细菌全部凝集沉淀于管底。（++）强，上液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。（+）弱，上液混浊，细菌少部分凝集。（-）不凝，液体呈乳状与对照管相同。效价判定：以能出现“++”凝集现象的血清最高稀释度为该血清的凝集效价。一般认为O抗体效价在1：80以上，H抗体效价在1：160以上，有辅助诊断意义。H甲或H乙达到1：80或以上具有诊断意义。但在分析结果时，应注意以下两点：（1）非肠热症患者，由于曾接种过伤寒，副伤寒疫苗或以往在流行区有过隐性感染或患过伤寒，副伤寒，以及回忆反应等原因，也可呈现阳性结果。不过，由这些原因所引起的阳性反应主要是H抗体升高，O抗体效价一般不高，同时，每隔5~7天试血一

5、次，其抗体效价一般不会随病程而升高。上述这些都有别于现症感染。（2）少数肠热症患者，由于发病初期曾使用大量抗生素，或机体有免疫缺陷病，或机体反应性极弱等原因，抗体效价可以很低，甚至为阴性结果。因此不能只根据肥达氏试验的结果去作简单肯定或否定的结论，必须结合当地流行情况，既往接触史，以及临床症状和体征，做出正确的判断。2.肥达反应的诊断标准：肥达反应是诊断伤寒副伤寒的辅助诊断，其结果的解释必须结合临床变现和病程，病史，以及地区流行病学情况。机体患伤寒、副伤寒，一般于发病后1~2周内血液中出现特异性抗体并且随着病程延长而效价渐升，此时即可为阳性，第4周可达峰值，以后又逐渐降低。一般以“O”凝集效价

6、在1/80或以上和"H”在1/160或以上为阳性。O抗体主要是IgM,出现较早；H抗体主要是IgG,出现较晚。根据此特点，肥达试验结果有如下诊断价值：二者均超过正常值，患伤寒的可能性大；二者均在正常值内，患伤寒的可能性小；H抗体效价超过正常值，O抗体效价正常，可能是接种了伤寒菌苗或者是接种的回忆反应；O抗体效价超过正常值，H抗体效价正常，可能是伤寒早期或者其他沙门氏菌感染；一般间隔1~2周复查，若抗体效价比前次结果增高2~4倍，则具有诊断价值。六、教师评价实验报告实验名称沉淀反应实验日期院系专业班级姓名学号一、实验目的掌握对流免疫电泳的原理和方法，了解其用途。二、实验器材器材：电子天平、锥形瓶

7、、200ml量筒、药匙、称量纸、水浴锅、微波炉、洗耳球、玻片、移液管、废液缸、打孔器、胶头滴管、移液枪、镊子、纱布条、电泳槽试剂：pH8.60.05mol/L巴比妥缓冲液、琼脂粉三、实验原理1.对流免疫电泳也称反向免疫电泳或免疫电渗电泳，其实质是定向加速的电泳技术与免疫双扩散技术的结合。抗原和抗体在一定的pH条件下，由于带电荷量的多少及分子量大小不同，在电场中以不同的速度作定向移动。在pH8.6的