土壤中分解尿素的细菌的分离与计数53349培训讲学.ppt

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1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3细菌脲酶分离产生脲酶的细菌一、课题背景二、研究思路（一）筛选菌株提出的问题—如何寻找耐高温的酶？解决问题的思路—寻找耐高温环境；原理—高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌，耐高温菌种提取耐高温酶。15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？固体培养基②在此培养基中

2、哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素选择培养基（二）统计菌落数目：1、活体计数法（稀释涂布平板）（1）操作方法：稀释涂布平板→统计菌落数（2）原理：1个菌落→1个活菌（3）统计原则①选30∼300个菌落的平板统计②每个稀释度取3个平板取其平均值例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗

3、？如果有问题，错在哪？甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值?（二）统计菌落数目1、活菌计数法（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此统计结果一般用菌落数表示。每克样品中的菌株数=（C/V)*MC:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V:所用稀释液的体积；M:稀释倍数。2、显微镜直接计数利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别得到以下两种统计结果。1、A同学筛选出150个菌落。2、B同学筛选出50个菌落。B认为A的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素

4、的细菌也能在该培养基中生长。A确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。请你帮助A同学改进实验，提供具有说明了的证据。设置对照—同等条件下，培养空白培养基?四、实验过程（一）土壤取样1、天然培养基和合成培养基：2、土壤取样：（1）取样的位置：土壤，天然培养基，含有大量的微生物，其中70∼90％是细菌。在富含有机质的土壤层的3∼8cm处中分布着绝大多数的细菌。（2）取样要求：铲去表层土。菌落计数配制土壤溶液系列稀释涂布平板与培养（二）样品稀释（1）测细菌数：一般用104、105、106稀释液（2）测放线菌：一般用103、104、105稀释液（3）测真菌数：一般用102、103、104

5、稀释液原则：确保平板上的菌落数在30∼300之间。（三）微生物的培养与观察1、接种：用适当的稀释液作涂布平板2、培养：细菌：30∼37℃，1∼2d;放线菌:25∼28℃,5∼7d;霉菌:25∼28℃,3∼4d.3、观察：a.每24h统计一次菌落数目b.以“稳定菌落”为观察对象（四）鉴定：筛选后必鉴定鉴别培养基：不影响微生物的生存酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性(1)作样品系列稀释液(2)用适当的稀释液涂布平板在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征。关注菌落的形态、大小、边缘、突

6、起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征1.使用选择培养基的目的是（　）A.培养细菌B.培养真菌C.使需要的微生物大量繁殖D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素实践训练CD4.下列说法不正确的是（　）A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温

7、的TaqDNA聚合酶B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（　　）A.较多的氮源物质B.较多的碳源物质C.青霉素类药物D.高浓度食盐BC巩固练习(2016四川卷)图甲是从土壤