酶组织化学概论课件.ppt

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1、酶组织化学EnzymeHistochemistry1概述1、酶（enzyme)：由活细胞产生，能在体内起催化作用的一类特异性蛋白质——生物催化剂。物质EABDC酶促反应E底物substrate2概述2、酶的命名：习惯命名法命名原则举例1、酶对底物的特异性脂肪酶，核酸酶2、根据催化反应性质（具有特异性）催化底物水解反应，称水解酶3、根据底物与催化反应性质催化乙醇脱氢的酶，称乙醇脱氢酶。4、根据酶的来源胃蛋白酶，胰蛋白酶等5、根据酶的特性碱性磷酸酶，酸性磷酸酶3概述3、酶的分类：按酶促反应的性质，国际生物化学酶学会（EC）将酶分

2、为六类，如下表：EC编号酶名1氧化还原酶（oxidoreductases)2转移酶（transferases)3水解酶（hydrolases)4裂解酶（lyases)5异构酶（isomerases)6连接酶或合成酶（ligasesorsynthetases)4一、组织化学显示酶的方法（一）免疫组织化学（immunohistochemistry)Ag+AbAg-Ab胰岛B细胞5一、组织化学显示酶的方法(二）酶组织化学（enzymehistochemistry)1、定义：酶组化是用组织化学的方法证明酶的存在的一门学科，其目的在于

3、阐明组织细胞内的化学反应、功能及其生物学意义。维持C形态和执行功能的化学物质有色形象探讨其在生理或病理状态下形态与机能相结合的一门学科62、研究化学物质的方法：（1）将组织、细胞完全破坏和捣碎，进行检查。——生物化学方法。（2）提取组织细胞内特殊组成成分或细胞器、膜系统以探讨其中存在的化学物质及其功能。——组织化学方法。（3）不破坏组织细胞，保持其完整结构，使其中的化学物质在原位变成可见物质，了解其存在和功能。——细胞化学方法（酶组化）7二、酶组织化学的基本理论（一）酶的定位localizationofenzyme在一定组织

4、细胞及细胞器的超微结构中存在着特定的酶，其存在的特定部位称为酶的定位。细胞内酶的定位因酶的种类及细胞器不同而有差异，它们都有自己固定的位置。因此所采用的定位检查法必须准确。酶亚细胞部分DNA核苷酸转移酶核SDH、CCO线粒体G-6-P内质网ACP溶酶体5’-核苷酸质膜LDH胞液8线粒体结构酶类间质三羧酸循环中的酶等内膜SDH，CCO等内外膜间空隙腺苷酸激酶、核苷酸磷酸激酶等外膜NADH脱氢酶、细胞色素b5还原酶等9二、酶组织化学的基本理论（二）酶反应是在一定条件下，组织细胞内的酶作用于底物，将底物的分解产物作为反应产物，在作

5、用部位进行捕捉，使其具有可见性。这种酶促反应称为组织化学酶反应（enzymereactionofhistochemistry)ESIRPE捕捉反应FRP10ESIRPE捕捉反应FRPS：底物，酶具有只作用于该底物的性质称底物特异性IRP（initialreactionproduct)：初级反应产物，指底物被酶直接分解的物质，不溶于水、脂类最为理想，以免发生扩散。FRP(finalreactionproduct)：最终反应产物，指不溶性IRP被偶联而显色。11三、光镜酶组织化学证明法（一）金属--金属盐法（metalpreci

6、pitationmethod)1、定义：指金、银、铜、铁、铝、钴等金属，其盐和化合物或其本身都具有颜色，容易发生呈色反应。而且酶的反应产物和金属多半可以结合。因此，捕捉酶反应的分解产物，使其与金属结合，利用其呈色反应，再现出酶反应的部位，以证明酶的存在。这类方法总称为金属--金属盐法或金属沉着法。大部分水解酶用此方法证明。Fe2+DP+DPFe2+122、方法：三种（1）第一种方法：Gomori和高松（1939）SE+MP1P2+Fe置换显色沉着在作用局部证明酶反应酶反应13如：证明碱性磷酸酶方法R-PO4Na2+H2OR-

7、OH+CaHPO4CoHPO4金属置换ALPCa2+Co2+CoS(NH4)2S酶反应沉着显色用钴置换——硫化钴法（CoSmethod)用银置换——硝酸银法或银反应法（silvermethod)14（2）第二种方法：是酶作用于酶底物后生成的分解产物与底物孵育液中的金属离子相结合，直接沉着于酶的反应部位，然后使其显色。反应式如下：R-PO4Na2+H2OR-OH+PbHPO4PbSPb2+(NH4)2S酶反应沉着显色使用此种方法的条件是底物溶液中H+浓度为中性或弱酸性，常常利用易获得的硝酸铅或醋酸铅。因此本法常被用于ACP和在

8、中性附近起作用的磷酸酯酶类。本法称为硫化铅法（PbSmethod)15（3）第三种方法：与使用天然底物的前两种方法不同，本法使用的是人工合成底物，在酶的作用下，底物的分解产物与特定的金属结合，立即显色，或通过显色操作使其显色，然后进行观察。163、金属-金属盐法的优缺点（1）优点：①底物、