土壤中的微生物分离纯化和菌相分析.pdf

土壤中的微生物分离纯化和菌相分析.pdf

ID:57287006

大小:2.84 MB

页数:29页

时间:2020-08-09

土壤中的微生物分离纯化和菌相分析.pdf_第1页
土壤中的微生物分离纯化和菌相分析.pdf_第2页
土壤中的微生物分离纯化和菌相分析.pdf_第3页
土壤中的微生物分离纯化和菌相分析.pdf_第4页
土壤中的微生物分离纯化和菌相分析.pdf_第5页
资源描述:

《土壤中的微生物分离纯化和菌相分析.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库

1、土壤中的微生物分离纯化和土壤中的微生物分离纯化和土壤中的微生物分离纯化和菌相分析菌相分析菌相分析一、实验目的掌握用平板分离法和划线分离法分离土壤中的微生物(好气性细菌、放线菌和一般真菌)。二、实验原理•从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。•分离微生物时一般是根据该微生物对营养、PH、氧气等要求的不同,供给它们适宜的生活条件,或加入某种抑制剂造成只利于该菌生长,不利于其他菌种生长的环境,从而淘汰不需要的菌种。•微生物分离纯化的方法主要有:平板划线分离法和稀释涂布平板法。后者除能有效分离纯化微生物外,还可用于测定样品中活菌

2、数量。三、实验器材1.土壤2.培养基:牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(营养琼脂)(50μg/mL制霉菌素乙醇溶液)高氏一号琼脂培养基(10滴100g/L石碳酸和50μg/mL制霉菌素乙醇溶液)马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)(1000mL培养基中加入2mL氯霉素)3.溶液与试剂:9mL或4.5mL无菌水的试管,90mL无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶四、操作步骤(一)稀释涂布平板法1.倒平板:将培养基加热溶化,保温55-60℃,每个培养皿倒入15-20mL培养基,静置冷却固化。倒平板的方法:右手持盛培养基的试管或三角烧瓶置火焰旁边,用左手将试管塞或瓶塞轻轻的拔出,试管口或瓶口保持

3、对着火焰;然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住试管塞。左手持培养皿并将皿盖在火焰旁打开一缝,迅速倒入培养基约15mL,加盖后轻轻摇动培养皿,使培养基均匀分布在底皿底部,然后平置于桌面上,待凝后即为平板。倒平板2.制备十倍梯度菌稀释液:用一支1mL无菌吸管吸取0.5mL菌悬液加入4.5mL无菌水的试管中充分混匀,此为10-1稀释液,以此类推制成10-2、10-3、10-4、10-5和10-6六种十倍梯度稀释的菌悬液。从土壤中分离微生物的操作过程3.涂布:将上述每种培养基的平板底部或培养皿盖周边用记号笔分别写上10-4、10-5和10-6三种稀释度字样,每种培养基每

4、稀释度标记2皿,然后用无菌吸管分别由10-4、10-5和10-6三管菌悬液中吸取适量对号放入已写好稀释度的平板中央位置,每皿准确放入0.2mL,用无菌玻璃涂布棒在培养基表面轻轻涂布均匀,其方法是将菌液先沿一条直线轻轻的来回推动,使之分布均匀,然后改变方向90°沿另一垂直线来回推动,平板内边缘处可改变方向用涂布棒在涂布几次,室温下静置5-10min。4.培养:将平板倒置于37℃温室中培养1-2d。5.挑菌落:将培养后长出的单个菌落分别挑取少许菌苔接种在不同培养基的斜面上,置37℃/28℃培养;待菌苔长出后,检查其特征是否一致,同时将细胞图片染色后用显微镜检查是否为

5、单一的微生物细胞。若发现有杂菌,须再进行一次分离与纯化直到获得纯培养。(二)平板划线分离法1.倒平板2.划线:在近火焰处,左手拿皿底,右手拿接种环,挑取待测菌悬液一环在平板上划线。划线的方法很多,但无论采用哪种方法,其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释,培养后能形成单个菌落。划线方法方法一:用接种环按无菌操作挑取土壤悬液一环,先在平板培养基的一边作第一次平行线3-4次,再转动平板约70°角,并将接种环上剩余物烧掉,待冷却后挑取悬液穿过第一次划线部分进行第二次划线,再用同样的方法穿过第二次划线部分进行第三次划线或再穿过第三次划线部分进行第四次划线。划线完毕后,

6、盖上培养皿盖,倒置于温室培养。方法二:将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线,完毕后,盖上培养皿盖,温室培养。平板划线操作图A分段划线B连续划线3.挑菌落:从分离的平板上单个菌落挑取少许菌苔于不同培养基斜面上,做锯齿状划线,37℃培养后,涂在载玻片上,在显微镜下观察细胞的个体形态,结合菌落形态特征,综合分析。如不纯,仍需平板分离法进行纯化,直至确认为纯化培养为止。活菌计数一、实验原理平板菌落计数法(活菌计数)是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的,也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时,先将待测样品作一系列稀释,再取

7、一定量的稀释菌液接种到培养皿中,使其均匀分布于平皿中的培养基内,经培养后,由单个细胞生长繁殖形成菌落,统计菌落数目,即可换算出样品中的含菌数。这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。但平板菌落计数法的手续较繁,而且测定值常受各种因素的影响。二、实验步骤(方法一)1.编号:取无菌培养皿6套,分别用记号笔表明10-4、10-5、10-6各2套。另取6支4.5mL无菌水的试管,依次表明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5和10-6。2.稀释:用1mL无菌吸管准确吸取0.5mL已充分混匀的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的混合培养液,加入标有10-1字样的试管中,此

8、为10倍稀释,吸管中多余

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。