多肽药物的含量测定方法.ppt

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1、肽类药物的含量测定方法背景：多肽类药物及其主要优势人体的生长和发育都离不开多肽，多肽是调节系统功能和细胞生长的基础。多肽类药物作为药物开发的主要方向，它包括多种类型，常见的多肽类药物有如下几种.多肽类疫苗：多肽类疫苗的研制为人类攻克肝炎、艾滋病等疾病带来了希望。.抗肿瘤多肽类药物：肿瘤危害人类的生存，其产生是多方面因素共同作用的结果，但归根到底是癌基因表达的问题。多肽类抗癌药物由于其能够成为肿瘤基因表达时的调控因子，因而成为了抗癌药物研究的新希望。.抗病毒类多肽药物：一般来说，病毒感染细胞的过程包括以下几个主要阶段：吸附、自我复制、重新组合、释放病毒等。。抗病毒多肽通常作用于病毒吸附

2、和病毒复制两个阶段，通过与宿主细胞特异性结合或者病毒蛋白酶结合来发挥作用。一、酸碱滴定法示例：苯酪酞的测定测定方法：取本品约0.5g精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液呈中性）60ml，振摇，溶解后加酚酞指示液数滴，用氢氧化钠滴定（0.1mol/L)，即可。二、紫外分度光度法示例：五肽胃泌素含量测定五肽胃泌素为白色或类白色粉末。本品能促进胃酸、胃蛋白酶及内因子的分泌，其促胃酸分泌作用相当于内源性胃泌素的1/4，作用可持续10~40分钟。临床上主要用于胃酸分泌机能的检查。方法原理：供试品加0.01mol/L氨溶液定量稀释，制成供试液，置紫外可见分光光度计,于280nm波长处测定吸收度，计

3、算出其含量。试剂：氨溶液（0.01mol/L）标准品：E1%1cm为70计算仪器设备：紫外可见分光光度计注：分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照，采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波长作为测定波长，一般供试品的吸收度读数，以在0.3-0.7之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度偏低。狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。三、效价测定法实例（1）：抑肽酶效价的测定抑肽酶(Trasylol，别名：抑胰肽酶、屈来密多)能抑制胰蛋白酶

4、及糜蛋白酶，阻止胰脏中其他活性蛋白酶原的激活及胰蛋白酶原的自身激活。临床用于预防和治疗急性胰腺炎、纤维蛋白溶解引起的出血及弥漫性血管内凝血。还可用于抗休克治疗。在腹腔手术后，直接注入腹腔可预防肠粘连。抑肽酶通过酶上的丝氨酸活性部分，形成抑肽酶-蛋白酶复合物而达到抑制作用。然而与不同的蛋白酶结合，显示出不同的离解常数。与胰蛋白酶的结合最牢固．与人体纤溶酶的结合不很牢固。（1）底物溶液的制备(2)胰蛋白酶稀释溶液的制备精密量取胰蛋白酶溶液1ml，用硼砂－氯化钙缓冲液（pH8.0）稀释成20ml，室温放置10min，置于冰浴中。取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐171.3mg，加水溶解并稀

5、释至25ml。临用时配制。胰蛋白酶溶液的制备取胰蛋白酶对照品适量，精密称定，加盐酸滴定液（0.001mol/L）溶解并制成每1ml中约含0.8单位（每1ml中约含1mg）的溶液，临用时配制并置于冰浴中。(3)供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，加硼砂一氯化钙缓冲液（pH8.0）溶解并制成每1ml中约含1.67单位（每1ml中约含0.6mg）的溶液，精密量取0.5ml与胰蛋白酶溶液2ml，再用硼砂一氯化钙缓冲液（pH8.0）稀释成20ml，反应10分钟，置冰浴中（2小时内使用）。(4)测定法取硼砂－氯化钙缓冲液（pH8.0）9.0ml与底物溶液1.0ml，置25ml烧杯中，于25℃±

6、0.5℃恒温水浴中放置3～5分钟，在搅拌下滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）调节pH值为8.0，精密加入供试品溶液（经25℃保温3～5分钟）1ml，并立即计时，用1ml微量滴定管以氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定释放出的酸，使溶液的pH值始终保持在7.9～8.1。每隔60秒读取pH值恰为8.0时所消耗的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）的体积（ml），共6分钟。另精密量取胰蛋白酶稀释溶液1ml，按上法操作，作为对照（重复一次）。以时间为横坐标，消耗的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）为纵坐标作图，应为一条直线。供试品和对照两条直线应基本重合，求出每秒钟消耗氢氧化钠滴定液（0

7、.1mol/L）的体积（ml），按下式计算。每1mg抑肽酶的效价（单位）式中4000为系数；W为抑肽酶制成每1ml中约含1.67单位时的酶量，mg；n1为对照测定时每秒钟消耗的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）的体积，ml；n2为供试品溶液每秒钟消耗氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）的体积，ml；2为供试品溶液中所加入胰蛋白酶的量为对照测定时的2倍；f为氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）校正因子。效价单位定义能抑制一个胰蛋白酶单位[每秒钟能水解1μmol的