中试发酵罐操作规程.doc

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1、中试发酵罐操作规程一、准备*注：①发酵罐装液量一般在60~70%；②氯离子对不锈钢会带来不可逆转的破坏，因此应避免用盐酸溶液调节pH，如工艺上无法避免加盐酸，应控制盐酸溶液浓度不大于5%且在添加过程中不得直接接触不锈钢。1.启动发酵控制系统，启动蒸汽发生器。2.更换罐盖上各补料口橡皮塞，盖紧罐盖上各种盖帽，旋紧罐盖上压紧螺栓。3.进入控制器“标定”界面，标定pH电极，将pH电极、DO电极插入罐体侧面的传感器口并及时的锁紧螺母（确保安装妥当防止高压下传感器弹出伤人）。4.关紧发酵罐底阀（注意开关方向），倒入培养基，加入适量消泡剂。5.按下控制器下方搅拌开关，设定搅拌转速100Rpm并“自

2、动”控制。调整pH值，盖紧投料口。6.开夹套排水阀，微开发酵罐出气阀，关紧其他阀门。7.如需控制PH，根据补料口大小选择适宜的补料针，准备补料瓶，并灭菌。8.如需补料，根据补料多少选择适宜的补料瓶或补料罐，并灭菌。二、培养基灭菌*注：①随温度升高，各压力均会有所增大，需随时调节压力。当往罐内通蒸汽后，发酵罐罐内压力会逐渐升高，当罐温达到121℃时，应控制罐压在0.1Mpa左右。②保温开始后，排气阀蒸汽排量不宜太小，否则可能导致液面以上的罐体部分尤其罐盖达不到消毒温度。③在灭菌完成前，启动空气压缩机和冷冻循环水机组。1.蒸汽进夹套：缓缓开夹套蒸汽阀（此时有轻微爆破声属正常，如声音过响，则

3、开阀的速度应减慢）。待管道排水总口排出蒸汽时适当调节排水阀，控制蒸汽排出量以有少量蒸汽冒出即可。控制夹套内压力不超过0.15Mpa。2.当培养基预热至98℃时，适当调节夹套蒸汽阀，使培养基温度稳定在100℃左右，计时10min。此时,培养基中的溶氧接近零,标定溶氧的零点。此后微开或关闭夹套蒸汽阀。3.当培养基温度达到100℃，蒸汽进过滤器（如F3-500L、F4-2T罐过滤器一直保持正压，蒸汽另有管路可进罐）：微开过滤器上排冷凝水阀（部分罐有2个排冷凝水阀），缓缓开过滤器前蒸汽阀，排出蒸汽管道内冷凝水。当蒸汽过滤器的排冷凝水阀出口冷凝水很少时，开连接过滤器和发酵罐的切断阀，蒸汽进入发酵

4、罐，调节排冷凝水阀，以有少量蒸汽排出为宜。调节切断阀（切断阀不得关死）和蒸汽阀，维持过滤器前蒸汽压力为0.1~0.18Mpa。4.当培养基温度达到100℃，蒸汽进取样器:开出料阀，开蒸汽阀，排出蒸汽管道内冷凝水。当出料口冷凝水很少时，调节出料阀，以有少量蒸汽排出即可。适当开大蒸汽阀，当蒸汽压力大于0.15Mpa，开发酵罐底阀，蒸汽从底阀进罐。调节蒸汽阀（可适当调节底阀），维持蒸汽压力为0.15~0.25Mpa。5.当达到预定温度（常为121℃），微开接种口盖子（除F4-2T罐）至有少量蒸汽排出，（开F2-50L罐移种管路的旁路阀和排气阀，至有少量蒸汽排出），根据罐温变化的趋势，及时调节

5、蒸汽阀、排气阀。阀门调节宜微调应避免大幅度开关。当罐温维持在预定的范围内开始计时。三、灭菌完成及降温（先开后关，后开先关）*注：①在降温过程中，罐压会相应降低，始终监视罐压，严禁压力掉零。②在降温过程中，部分已关闭的阀门需二次关紧。1.旋紧接种口盖子、移种管路的旁路阀，微开排气阀。2.旋紧罐底阀，关紧出料阀，再关紧取样器的蒸汽阀。3.关紧空气管线切断阀及排冷凝水阀，关紧过滤器前蒸汽阀。关夹套蒸汽阀。4.微开进气量调节阀，全开进空气阀，开排冷凝水阀。待罐压降至0.05Mpa左右时，关排冷凝水阀，开空气管线切断阀，空气经过滤器、空气管线切断阀进入发酵罐。5.当罐温低于100℃，关夹套冷凝水

6、阀，开夹套进冷凝水阀和回冷凝水阀（F3-500L、F4-2T罐开夹套进自来水阀和排水阀，温度较低后改成开夹套进冷凝水阀和回冷凝水阀开夹套进冷凝水阀和回冷凝水阀）。在控制器中将温度控制方式设定温度为并将控制方式设定为“自动”，发酵罐进入自动降温。6.在降温过程中，始终监视罐压，严禁压力掉零。当温度到达工艺要求时，调节搅拌转速、空气流量，调整罐压、标定溶氧电极斜率。四、接种及发酵1.摇瓶倒种:调节进气量调节阀至较低进气量，开排气阀至罐压接近零（不得大于0.02Mpa），予先旋松接种口，在接种口处放好酒精棉并点燃，打开接种口，倒入种子，然后旋紧接种盖，立即调高罐压。2.差压移种:①移种管线灭

7、菌：关紧受种阀，开排冷凝水阀，开移种管线蒸汽阀，开移种管线切断阀，当排冷凝水阀处冷凝水排尽后调节移种管线蒸汽阀、移种管线切断阀以有少量蒸汽排出为宜。灭菌30分钟后，依次关紧排冷凝水阀、移种管线切断阀、蒸汽阀，并立即开受种阀，用受种发酵罐中的空气对移种管线进行保压。等移种管线冷却后就可以移种。②差压移种：调整种子罐与发酵罐的压力，维持种子罐罐压大于发酵罐罐压约0.05Mpa，开种子罐罐底阀，种液进入发酵罐。移种结束必须立即关紧受种阀并调高发酵罐罐