链脲佐菌素致大鼠糖尿病性白内障的发病机制.pdf

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1、链脲佐菌素致大鼠糖尿病性白内障的发病机制作者：丁正华，严宏，郭勇，哈文静，王建伟【关键词】糖尿病性白内障；链脲佐菌素；发病机制【Abstract】AIM:Tosetupthediabeticcataractmodelandtoexplorethemechanismofdiabeticcataractinratsinducedbystreptozotocin(STZ).METHODS:DiabeticratsweremadebyasingleintaperitonealinjectionofSTZ(65mg/kg).Thechangesofpl

2、asmaglucose,urineglucoseandbodyweightweremonitoredandtheprogressionoflensopacificationwasrecordedusingtheslitlampeveryweek.At13thweek,thelevelsofglutathionereductase(GR),catalase(CAT),glutathione(GSH)andglycatedproteininlensweredetermined.RESULTS:About70%(14/20)oftheratsres

3、pondedtothestreptozotocininjectionandthediabeticsymptomswereobservedintheserats.Onlyonerats（1/14）wasrejectedforthedecreaseofplasmaglucose(14mol/L者纳为糖尿病组大鼠.正常组大鼠腹腔注射等量柠檬酸盐缓冲液.每笼5只饲养，饮用自来水，自由摄食，饲以大鼠常规颗粒饲料（第四军医大学实验动物中心提供）.大鼠一般情况的观察每日观察大鼠饮水、饮食量、尿量情况.每周称量大鼠体质量，每4wk大鼠尾端取血，滴于血糖试纸上

4、准确反应5s，使用罗氏血糖仪（爱康全）比色并记录，监测血糖变化，血糖低于14mol/L的大鼠予以剔除.大鼠晶状体混浊程度的观察复方托吡卡胺滴眼液点大鼠双眼1次，5s后使大鼠吸入乙醚蒸气而麻醉.使用BQ900裂隙灯观察大鼠，每周根据晶体混浊情况分级.分级标准参考牛津大学眼科实验室晶状体分级方法［3］.大鼠晶状体生化指标的测定13wk时脱臼法处死大鼠，摘除眼球，分离晶状体，称量晶状体湿重，以1∶19生理盐水在0℃冰水中研磨，按南京建成生物工程研究所试剂盒说明测定晶状体中蛋白、GSH含量及CAT,GR的活性.糖基化蛋白测定：①晶状体匀浆沉淀，5倍重

5、100g/L三氯乙酸（TCA）中研磨，4℃放置整夜；②10000g离心20min，移去上清液，用同体积100g/LTCA冲洗沉淀，10000g离心20min，移去上清液.③将沉淀放置于1mL二乙基乙醚内，室温下放置10min.11500g离心5min，移去上清液，用二乙基乙醚冲洗沉淀两次（1mL和mL）.将沉淀放置蒸发皿上，将二乙基乙醚挥发完.④将沉淀称重，放入带旋盖的密封试管内，加入1mol/L的草酸1mL.标准管由g5HMF和1mol/L草酸1mL组成，空白管为1mol/L草酸1mL.⑤保持100℃2h，再冷却到室温.将溶液加入离心管并加

6、入400g/LTCA，在冷水内冷却10min使蛋白沉淀.⑥3500g离心15min，从每管移出mL上清液到埃道夫管，进一步11500g离心5min.⑦取出上清液mL加入mol/L硫代巴比妥酸（TBA）mL，用1mol/L氢氧化钠调pH至，在波长为443nm处读数.使用不同浓度的5HMF测量绘制曲线图，查图计算晶状体糖基化蛋白含量.统计学处理：全部数据经SPSS统计软件处理.正常组大鼠与糖尿病组大鼠血糖、体质量及酶含量的分析，经方差齐性检验，方差齐，采用两样本t检验.正常组大鼠与糖尿病组晶状体混浊程度比较采用Wilcoxonranksumtes

7、t分析.2结果实验过程中大鼠血糖监测STZ注射后共有14只大鼠血糖大于14mol/L，占总数的70％（14/20）.STZ注射后72h，4wk，8wk，12wk，13wk时糖尿病组大鼠血糖明显高于正常组大鼠(P).STZ注射后2~13wk糖尿病组大鼠体质量明显低于正常组(P,表2).表213wk时大鼠晶状体中蛋白及酶的测定(略)aP

8、大鼠胰岛细胞再生能力旺盛或剩余胰岛细胞代偿功能好.糖尿病组所有大鼠晶状体都出现混浊，结果显示：前3～8wk晶状体混浊进展相对缓慢，第8～13wk晶状体进展相对迅速，