资源描述：
《HPLC-Column-原理、键合、封端、评价标准.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、UltimateTMColumn for UltimatePerformanceWelchMaterials,Inc.1色谱分离的基本原理色谱方法的分类液相色谱分离方法大致可以分为正相色谱、反相色谱、离子交换色谱、疏水作用色谱、体积排除色谱、亲和色谱以及手性色谱。在高效液相色谱法中，目前应用得最广泛的是正相色谱和反相色谱，其中反相色谱又是重中之中。色谱分离原理正相色谱的分离原理：根据溶质极性的不同而产生的溶质在吸附剂上吸附性强弱的差异而分离。反相色谱的分离原理：根据因溶质疏水性的不同而产生的溶质在流动相与固定相之间分配系数的差异而分离。2色
2、谱分离效果图3高效液相色谱仪的分析原理高效液相色谱仪的结构色谱柱在高效液相色谱仪中的作用和峰形产生原理高压泵进样器检测器色谱工作站色谱柱4高效液相色谱柱发展史19世纪70年代中期，HPLC仪开始出现，主要填料：10µm的无定型硅胶颗粒。70年代后期，发展了反相液相色谱。80年代，HPLC被广泛应用于化合物的分离，主要填料：粒径为5～10µm球形硅胶。90年代早期，粒径为5µm的高纯硅胶，即所谓的B型硅胶被发展，并成为这个行业填料的标准，这种B型硅胶含有微量的金属。90年代后期，为了满足快速分离的需求，发展了3µm或3.5µm的球形硅胶，其作
3、用和性能逐渐的获得了人们的认同和接受。21世纪早期，为适应超快速的分离要求，粒径小于2µm的填料被开发出来，发展出了整体柱、无机和有机杂化硅胶。目前，市场上流行的分析用的HPLC硅胶基质填料主要为B型硅胶。5HPLC色谱柱及其填料的特征HPLC色谱柱的基质材料硅胶与聚合物现代高效液相色谱填料的特征色谱柱结构固定相键合相色谱柱接头键合相稳定性6硅胶基质材料目前应用最为广泛的基质材料。高机械强度和高的比表面积。可利用直接的广泛的表面键合反应来满足正相、反相、离子交换、疏水作用色谱和体积排除色谱的需求。高效。重现性好。pH适用范围为pH2－8。具
4、有容易导致强碱性物质拖尾的，表面活性和带酸性的硅羟基。7聚合物基质材料交联苯乙烯、二乙烯基苯和甲基苯烯酸酯。pH稳定性好：pH1－13。可以在很宽的范围内进行表面化学处理以满足反相色谱、离子交换色谱、疏水作用色谱和体积排阻色谱的需求。在中等pH条件下对强碱性物质具有更好的峰形。填料的体积随着流动相的不同而改变，如膨胀或收缩。分离效率相对硅胶而言比较低重现性不好8硅胶外形的影响无定型硅胶:最初的HPLC填料粒径>5µm柱床稳定性差比表面积较小价格便宜球形硅胶:现代HPLC填料粒径小(5µm,3µm,<2µm)重现性好稳定性好分离效率高9硅胶纯
5、度的影响硅胶纯度对强极性化合物的分离最重要。以前的纯度较低的硅胶（称为A型硅胶）,A型硅胶是以金属硅酸盐制备而来，具有很高的金属含量，可被用作中性化合物和非离子化合物的分离。纯度高、酸性较弱的硅胶(称为B型硅胶)，这种硅胶是以无金属的工艺制备而来，只含有微量的金属，建议用于分离离子化合物和可电离的化合物，特别是碱性化合物。金属杂质引起对螯合剂和碱性化合物的分离产生不对称峰或拖尾峰。10硅胶纯度的影响M+表面金属能与螯合化合物络合MSiOH内部的金属对表面硅羟基具有活化作用强酸性A型硅胶C18B型硅胶C1811硅胶孔径的影响孔径作用和效能<6
6、0nm对HPLC分析没有用，会引起峰形拖尾和较低的分离效率60–150nm对小分子的分离效果理想(MW<4,000to130,000),例如药物分子、传统的中药和小分子的缩氨酸300–1,000nm对大分子的分离效果理想，如多肽、核苷和高分子>1,000nm对聚合物的分离效果理想，如DNA和生物大分子12硅胶粒径的影响粒径作用和效能5µm目前应用最广泛，可以满足从分析到半制备的分离3–3.5µm常用于分析柱上的快速分离，色谱柱短，节省溶剂<2µm常应用于超快速分离，highthroughput,分离度高7–10µm常用于半制备色谱柱10–2
7、0µm常用于制备色谱柱13HPLC色谱柱的构成类型内径D(cm)柱长(cm)粒径(µm)分析柱0.3–0.463-253-10微孔柱0.1,0.2115,253-8半制备柱0.8–1.010-255-20制备柱2.0–5.010-255-2014键合相键合相:反相:70%;C18,65%;C8,15%;Cyano,5%,苯基柱<5%,正相:20%;硅胶、-NH2、-CN其它(手性柱,离子交换柱):10%反相色谱是目前应用得最为广泛的高效液相色谱方法。C18和C8在反相色谱终应用得最为广泛。15为什么反相色谱应用如此广泛?它能使中性化合物和极
8、性化合物在一根色谱柱中得到分离。适用于多种基体中的多类不同性质化合物的测定和分离。保留时间可以用分子的疏水性进行描述和解释。所用高纯度的水、甲醇和乙腈等溶剂价格便宜、实用。选择性
