天狼星红染色.doc

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1、苦味酸天狼猩红染色：取出培养箱内的CFs培养板，取出爬片，标记↓PBS洗，5min×3次↓4%多聚甲醛固定15min↓PBS洗，5min×3次↓天青石蓝液染5-10分钟↓PBS洗5min×3次↓苦味酸天狼星红液染15-30分钟↓PBS洗5min×3次↓苏木精复染5-10min↓90%乙醇、95%乙醇、100%乙醇脱水↓二甲苯透明，中性塑胶封固↓倒置显微镜下观察结果并照相保存↓染色结果I型胶原呈亮红色或黄色，III型胶原位于I型胶原的周边呈绿色[试剂配制](1)天狼星红饱和苦昧酸液：0.5％天狼星红10ml，苦味酸饱和

2、液90ml。(2)天青石蓝液：天青石蓝B1.25g，铁明矾1.25g，蒸馏水250ml。溶解煮沸、待冷却过滤。加入甘油30ml，然后再加入浓盐酸0.5ml。[注]：偏光显微镜观察胶原纤维。l型胶原纤维：紧密排列，显示很强的双折光性，呈黄色或红色的纤维。II型胶原纤维：显示弱的双折光，呈多种色彩的疏松网状分布。III型胶原纤维：显示弱的双折光，呈绿色的细纤维。lv型胶原纤维：显示弱的双折光的基膜，呈淡黄色。