转基因大豆BPS—CV127-9PCR定量检测研究-论文.pdf

《转基因大豆BPS—CV127-9PCR定量检测研究-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第31卷第5期大豆科学V01．3lNo．52012年1O月SOYBEANSCIENCE0ct．2012转基因大豆BPS—CV127．9PCR定量检测研究李宁，赵蕾，孙红炜，李凡，杨淑珂，路兴波(1．山东省农业科学院植物保护研究所／山东省植物病毒学重点实验室，山东济南250100；2．济宁医学院公共卫生学院，山东济宁2720673．山东师范大学生命科学学院。山东济南250014)摘要：采用SYBRGreen实时荧光定量PCR技术，建立转基因大豆BPS—CV127-9的定量检测方法。通过设计特异引物，扩增内标准基因lectin和BPS-CV1

2、27-9的5侧翼序列，建立2种基因的拷贝数一CT标准曲线，根据标准曲线方程计算样品中的转基因含量，并且通过熔解曲线分析扩增反应特异性。结果表明，lectin基因和侧翼序列标准曲线线性关系良好，值分别为0．999和0．998，变异系数(CV)1．50％～18．51％、标准偏差(SD)0．02～0．07。检测4个已知BIaS—CV127-9含量(1％、0．5％、0．1％、0．05％)的转基因混合样品，实测值与实际值接近。该检测方法具有快速、灵敏、准确、特异、高通量等优点，可以作为转基因大豆BPS．CV127-9的定量检测方法。关键词：品系特异

3、性；实时荧光定量PCR；转基因大豆中图分类号：$816．35文献标识码：A文章编号：1000-9841(2012)05-0808-05QuantitativeDetecti0n0fGeneticallyModifiedSoybeanBPS．CV127-9LINing，ZHAOLei，SUNHong—wei，LIFan，YANGShu—ke，LUXing—bo(1．InstituteofPlantProtection，ShandongAcademyofAgricuhuralSciences，Jinan250100，Shandong；2．Sc

4、hoolofPublicHealth，JiningMedicalUniversi—ty，Jining272067，Shandong；3．CollegeofLifeScience，ShandongNormalUniversity，Jinan250014，Shandong，China)Abstract：AquantitativemethodtodetectthetransgenicsoybeanBPS—CV一127-9byusingreal—timePCRtechniquebasedonfluorescencedyeSYBRGreen1was

5、investigatedinthisstudy．Theendogenouslectingeneandthe5flankingsequencesofBPSCV-127-9wereamplifiedthroughthespecificprimers，andthetransgeniccontentwasthencalculatedaccordingtothestandardcurveequation．MeanwhilethespecificityofPCRamplificationwasanalyzedbycorrespondingmeltin

6、gcurves．There—suitsshowedthatthestandardcurvesoflectinandthe5flankingsequencesofBPS—CV一127-9geneshavegoodlinearrelation—ship，andtheirRva]ueswere0．999and0．998，respectively．Thecoefficientofvariancewas1．50％一18．51％andstandarddeviationwas0．02-0．07．Fourmixedsampleswithgenetical

7、lymodifiedcontentsofBPS．CV一127—9was0．05％，0．1％，0．5％and1％respectivelyweredetected。andthedetectionresultsagreedwellwithactualvalue．Inconclusion，thismethodwasfast，sensitive，simple，accurate，specificandofhighthroughput，andcouldbeusedtodetecttransgenicsoybeanBPS—CV一127-9quantifi

8、cationally．Keywords：Event—special；Real—timePCR；Geneticallymodifiedsoybean近些年来，转基因技术日趋成熟，许多转基因转基因