菌体细胞裂解法汇总

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1、菌体/细胞裂解法汇总一、反复冻融法：1、将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。http://cache.baidu.com/c?word=%B4%F3%B3%A6%3B%B8%CB%BE%FA%2C%C1%D1%BD%E2&url=http%3A//www%2Ebioon%2Ecom/experiment/mb/mb1/200410/80878%2Ehtml&b=0&a=3&user=baidu2

2、、至少3次以上冻溶。http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3895899_0.html3、IFCC推荐法：收集细胞悬液，4℃低温离心（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-200C冷冻30min，370C解冻，如此反复3次，可形成细胞裂解液。http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/252157_0.html4、用液氮冻融三四次就可以了，细胞冻住后，取出放37度水浴，

3、溶解后震荡，再冻http://bbs.bioon.com/dispbbs.asp?BoardID=89&ID=142945&replyID=597858&skin=1二、超声波处理法1、要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。我的实验超声时间5秒、间隙时间10秒、工作次数20次。http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3895563_0.html2、每个样本超声时间5秒,

4、每个间隔5秒,粉碎5次。http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3895899_0.html3、100ml菌液离心，用8ml缓冲液悬浮，加8mg溶菌酶，冰浴30min，然后超声处理。750W40％功率。5秒超声，9秒间隔。超声至少90min。http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1861187_0.html4、综合冻融和超声的方法：1500g离心，弃除上清。冰上，用小体积PBS重悬细胞。将重悬液集中，1500g

5、离心浓缩，弃除上清。液氮骤冷。用约5倍体积的PBS缓冲液重悬细胞，并搅拌。可选择：4℃下超声破碎细胞。加入终浓度为0.25M的KCl，15mM的DTT。4℃下111500g×60min离心裂解液。取出上清。过柱子。PurificationofGST-FusionProteinsfromE.coli-AlternateProtocol三、渗透法：冰冷的20mmol/LTris-Cl（pH8.0），2.5mmol/LEDTA处理，冰浴放置10min。《精编分子生物学实验指南》四、裂解液处理法：1、细胞裂解液

6、：50mmol/LTris-ClpH6.8，100mmol/LDTT，2%SDS，0.1%溴酚蓝，10%甘油。SDS是阴离子型表面活性剂、极易促溶、强变性作用。http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1166442_0.html2、在loadingbuffer加SDS，100度5分钟，是变性方法。SDS与蛋白等量结合，可以通过条带位移判断蛋白大小，考染不会影响结果。http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4

7、936753&sty=3&keywords=SDS+%C1%D1%BD%E23、如果是做小量菌液，跑PAGE胶看其表达情况的话，可以直接加蛋白loadingbuffer煮沸5分钟即可，需注意的是上样前要离心12000rpm至少5分钟，然后上样时，枪头别吸最底下的。http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2524891_0.html4、20毫升细胞裂解液配方:40μL0.5MEDTA(PH8.0)，4ml10%SDS，1ml1MTris-cl(

8、PH6.8)，14.96ml蒸馏水。http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/196557_1.html5、我始终未明白楼主如果想收集全蛋白，而不考虑包涵体的话，为何要用超声呢？直接水煮不就可以了吗？http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2492252_0.html6、将1ml菌离心弃上清，留大概50ul，再加50ul2×上样缓冲液，煮10min，取