植物的组织培养实验指导课件.ppt

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1、植物组培实验操作指导北京川布兰生物技术开发有限公司技术部一、培养基制备配制培养基需要的仪器设备电子天平、烧杯、电磁炉或微波炉、不锈钢盆、移液器、吸头和吸头盒、高压蒸汽灭菌锅、组培瓶、量筒、药勺、玻璃棒、植物组织培养试剂盒。（见下图）培养基制备所需仪器设备及耗材1、称量溶解称取42g的MS固体培养基（图1）（试剂盒提供的每瓶42g），放入不锈钢盆中量取1L蒸馏水加入搅拌均匀溶解（图2，图3）。也可按照相应的比例配制合适体积的培养基。（图1）（图2）（图3）2、加热煮沸将溶解的培养基用电磁炉加热煮沸至琼脂全部溶解，溶液呈澄清态。

2、少量的培养基可用烧杯放于微波炉加热。煮沸溶解后添加蒸馏水补充加热损失的水分。（图4）（图4）3、添加激素调节pH按照培养的不同植物以及不同外植体添加合适的激素（图5）（矮牵牛腋芽转接不需加激素），调节pH值至6.0。（图6、7）（图6）（图7）4、分装待培养基冷却至50℃～60℃时，分装到组培瓶中，每瓶25～30mL，拧上盖子。（图8，10，11）注：瓶盖上的固定滤膜装置要拧紧，防止滤膜脱落。（图9）（图8）（图9）（图10）（图11）5、灭菌及冷却把分装好的组培瓶和培养皿放于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌20分钟。（图12，

3、13，14）灭菌结束后取出放置室温冷却凝固备用。（图12）（图13）（图14）二、无菌苗接种培养超净工作台、光照培养架或恒温光照培养箱、解剖剪、镊子、两面板（试管架）、酒精灯、火柴（打火机）、酒精棉球、无菌培养皿、废液缸。接种培养需要的仪器设备1、超净台灭菌打开超净工作台内的紫外灯和风机（开到低速档），把实验用到的相关器械放进超净工作台紫外照射灭菌20～30min。灭菌结束后关闭紫外灯，继续吹风5min去除臭氧的味道。（图15）（图15）2、双手消毒点燃酒精灯，使用酒精棉球擦拭双手，尽量擦拭到手指缝和指甲盖位置。（图16，1

4、7）注：如果用火柴点酒精灯一定要让火柴熄灭后方可放入废液缸，以免点燃使用过的酒精棉球引起火灾。（图16）（图17）3、接种器械消毒先使用酒精棉球对解剖剪（解剖刀）和镊子进行擦拭，然后放于酒精灯火焰进行灼烧，剪刀的交叉部位需张开活动以便充分灼烧。灼烧灭菌后放于两面板或试管架上冷却。（图17，18，19，20）（图17）（图18）（图19）（图20）4、修剪无菌苗把装有无菌苗的组培瓶口在酒精灯火焰周围灭菌几秒钟，打开瓶盖，用镊子夹出无菌苗放于无菌培养皿中，盖好培养皿盖子。（图21，22，23，24）（注：瓶口灭菌时间不宜过长，以

5、免烧坏瓶口）剪去无菌苗的叶子，只留下茎段和叶柄。把无菌苗按芽剪成“丫”字型，只留一个腋芽和叶柄。（图25，26，27）（图21、22、23、24）修剪叶片时先四周剪平，剪出伤口，叶子较大的话再剪开，最后剪成边长0.5cm大小即可。修剪茎段即剪取两个腋芽之间的部分。注意：使用叶片为材料时，挑选叶片较大植株；使用茎段为材料时挑选茎段较长的植株，方便修剪。（图25、26、27）5、接种培养把未接种培养基瓶口在酒精灯火焰灭菌2～3秒后打开瓶盖，用镊子夹取腋芽或叶片接种于培养瓶内。叶片平铺在培养基上，页面朝上，腋芽直接插入培养基即可。

6、（图28，29）（图28）（图29）接种结束后把瓶口和瓶盖在酒精灯火焰灭菌2～3秒后盖上瓶盖，放在光照培养架或者恒温光照培养箱内培养。（图30，31）培养条件：25℃室温光照培养12h，黑暗培养12h。（图30）（图31）三、移栽移栽到花盆或花圃、也可移栽至小型无土栽培系统。1、炼苗挑选长势较好而且长出根系的无菌苗，在移栽培养的环境中先闭瓶放置3天，再打开瓶盖放置3天，让无菌苗适应室内的温度和湿度。（图32）（图32）2、移栽到花盆炼苗结束后把无菌苗从组培瓶中取出，去净培养基，把组培苗移栽到蛭石和草炭土的混合基质中。（图33

7、，34，35，36）（图33）（图34）（图35）（图36）3、成苗开花在培养的过程中要经常浇水或营养液，温度维持在25℃～30℃，植株容易开花。（图37）（图37）实验结束Thankyou!