基因诊断和治疗ppt课件.ppt

《基因诊断和治疗ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、基因诊断王青概述第一节依据DNA生物学功能及分子遗传学中心法则，DNA（基因）在生物体蛋白质合成中起主要作用，一定结构的基因产生一定结构的蛋白质，一切生理和病理现象都直接或间接地受遗传基因控制。基因诊断的理论依据3是指运用分子生物学和分子遗传学方法对生物体的基因组DNA片段及其转录产物进行定性和定量分析，从而对疾病作出诊断。基因诊断的概念分析手段研究途径研究目的分子生物学、遗传学的技术和原理1.对DNA序列分析鉴定；2.对mRNA分析定量。在DNA水平分析、鉴定遗传性疾病所涉及基因的突变（置换、缺失或插入）4临床诊断基因诊断生化学诊断血清学诊断临床表现DNA转录mRNA翻译细胞核细胞膜

2、蛋白质5（一）高度的特异性（二）检测灵敏度及精确性高（三）可以早期快速诊断（四）检测材料来源广（五）被检测基因不一定要处于活化状态基因诊断的特点6对患者基因或DNA本身直接进行分析，具有高度的特异性基因诊断临床诊断血清学诊断生化学诊断以疾病表型改变为依据，非特异、出现时间较晚（一）高度的特异性疾病诊断7待测标本用量少，PCR方法可以检出pg（10-12g）水平的靶基因。可从人类长达3×106kb的基因组中检测单拷贝基因，并可检出某一基因的单碱基改变。（二）检测灵敏度及精确性高8如结核性脑膜炎，常规培养鉴定需几周时间，痰涂片染色镜检阳性率低，而应用PCR方法确诊只需一个工作日。由于人体各

3、种组织中得到的DNA都是一样的，因此，在妊娠早期取胎儿绒毛或在妊娠中期取羊水脱落细胞提取DNA，可进行遗传病的产前诊断。（三）可以早期快速诊断9机体各种组织的有核细胞均有全套基因组DNA，都可以作为分析的材料，而不必考虑表达问题（如β珠蛋白基因、苯丙氨酸羟化酶基因）。有的遗传病至今也不了解引起疾病的基因、基因产物和生化机理，但只要有与疾病连锁的遗传标志即可进行诊断。（四）检测材料来源广10即使细胞中基因在静止状态时（如血斑、精液斑中的DNA），也可被测出。（五）被检测基因不一定要处于活化状态11核酸杂交聚合酶链反应基本技术基因诊断的原理基因突变：DNA缺失、插入、移码突变、点突变12已

4、知基因的核酸序列(标记）待测的单链基因组DNA+待测DNA中含已知基因序列双链DNA（含标记物）（一）核酸杂交碱基完全配对互补结合杂交信号检测13待测物中含靶序列（二）聚合酶链反应（PCR）扩增产物检测引物、聚合酶、dNTP、MgCl2含微量靶序列的待测物(模板)+大量目的产物变性、退火、延伸循环扩增14（一）基因诊断检测的靶物DNA（基因）分析基因的结构mRNA从基因表达水平分析基因的功能基因诊断的条件15基因探针高度特异性灵敏显示系统基因组探针cDNA探针寡核苷酸探针RNA探针（二）基因诊断检测的探针探针:标记的已知序列核酸片段，包括DNA,cDNA,RNA,Oligonucleo

5、tide16基因组探针cDNA探针寡核苷酸探针RNA探针从相应的基因转录获得mRNA，再通过逆转录而获得。来自基因组DNA文库中有关的基因片段，经克隆或PCR扩增获得在体外人工合成碱基数不多的与基因序列互补的DNA片段。从病毒基因中分离；通过cDNA克隆或基因克隆经体外转录体系制备。17基因诊断的方法MethodofGeneDiagnosis第二节基因诊断的方法核酸分子杂交技术聚合酶链反应（PCR）技术连接酶链反应（LCR）DNA序列分析基因芯片技术限制性片段长度多态性（RFLP）分析19一、核酸分子杂交技术（一）原位（insitu）杂交（二）斑点印迹（spotblot）杂交（三）So

6、uthern印迹杂交（四）Northern印迹杂交20原位（insitu）杂交方法：不需提取DNA或RNA，直接用培养/采集的细胞（涂载玻片上）、组织切片（固定载玻片上）和细菌菌落（复印至滤膜上）与标记核酸探针杂交。用途：可测知特定基因的存在或表达状况，还可观察被测基因在细胞内或染色体上的定位。优点：不必提取核酸避免了抽提中核酸量的损失，因而比其他技术敏感的多，可在1%的细胞中检出目的核酸序列。21（二）斑点印迹（Spotblot）杂交方法：将提取的样本DNA或RNA，变性后，点样吸附在硝酸纤维膜(NC)/尼龙膜上，与探针杂交；或把细胞/病毒点在膜上，变性后杂交；或培养的菌落、菌斑原位

7、吸附于膜上，变性后杂交。用途：基因组中特定基因及其表达的定性、定量分析。优点：简便、快速、可在同一张膜上同时进行多样品检测。缺点：不能鉴定所测基因的分子量，特异性不高，有一定比例的假阳性。22基因诊断技术斑点杂交点样Probe-32P检测AB123423方法：把DNA经限制性酶切割、凝胶电泳后，再转移到硝酸纤维膜或尼龙膜上，与标记核酸探针杂交。（三）Southern印迹杂交用途：用于基因组中特定的基因或序列的定性及定量分析，也常用于鉴定克隆DN