分光光度法ppt课件.ppt

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1、分光光度法第一节概述分光光度法是利用被测物质在特定波长处或一定波长范围内对光的选择性吸收特性而建立的一种分析方法，属于光谱分析法。分类：根据测定的光的波长分紫外分光光度法可见分光光度法红外分光光度法特点：灵敏度高，适用于微量或痕量组分的分析操作简单、准确度较高、重现性好、应用范围广一、光的性质与波长范围光是一种电磁波，具有波粒二象性，即波动性和粒子性。光在传播时表现了光的波动性一定的光波具有一定的波长、频率、光速c等参数来描述：c=光的性质续前：波长：相邻两波峰或波谷之间的距离，波长的单位可用

2、纳米（nm），微米（um）表示：1nm=10-3um=10-6mm=10-7cm=10-9m频率（）：是每秒内光波的振动次数，单位是赫兹（Hz）续前光又具有粒子性，是由一颗一颗不连续的光子构成的粒子流，这种粒子叫光子，是量子化的。光子的能量（E）取决于频率，其关系为：E=h=hc/（h为普朗克常数：h=6.626×10-34J·S)可见：光的波长越短（频率越高），其能量越大。光的分类单色光：仅含某一种波长的光复合光：不同波长的光组合而成。如白光。物质对光的吸收具有选择性，若溶液选择性地吸收了某种

3、颜色的光，则溶液呈吸收光的互补光。波长范围：可见光区：400-760nm复合光紫外光区：近紫外区200-400nm远紫外区100-200nm红外光区：0.76~500um近红外区：0.76~2.5um中红外区：2.5~50um远红外区：50~500um二、分子吸收光谱的产生分子运动包括：分子外层的价电子运动——电子能级分子内原子在平衡位置附近的振动——振动能级分子绕重心轴的转动——转动能级分子能量：电子能量、振动能量、转动能量之和E电>E振>E转高能级的运动中包括低能级的运动续前当用一定波长的光线照射

4、试样时，其分子选择吸收了某些具有特定波长（或频率）的光子后，由较低能级（基态）跃迁到较高能级（激发态）时，所吸收光子的能量正好等于跃迁前后的能级差。把分子吸收能量随波长变化的情况记录下来所得的图谱为吸收光谱。利用物质的吸收光谱进行定性、定量及结构分析的方法称为吸收光谱法，简称光谱法。三、光的吸收定律（一）百分透光率（T）和吸收度（A）入射光I0→吸收Ia→透射ItI0=Ia+It透光率（描述入射光透过溶液的程度）T=It/I0或T%=It/I0×100%透光率的负对数称为吸光度，用符号A表示。吸光度A

5、=-lgT=lgI0/ItA愈大，溶液对光的吸收愈多。（二）朗伯-比尔定律当一束平行的单色光通过均匀、无散射现象的溶液时，在单色光强度、溶液的温度等条件不变的情况下，溶液对光的吸收度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。A=－lgT=ECL朗伯-比尔定律适用于无色溶液、有色溶液及气体和固体的非散射均匀体系。（三）吸收系数吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度。当溶液的浓度C的单位不同时，吸收系数的意义和表示方法也不同，常用的表示方法有两种：1、摩尔吸收系数：是指在一定波长下，溶液浓度为1mol/L，

6、液层厚度为1cm时的吸收度，用ε表示。2、百分吸收系数：是指在一定波长下，溶液浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm时的吸收度，表示。续前百分吸收系数与摩尔吸收系数之间的关系是：吸收系数是物质的特性常数，表明物质对某一特定波长光的吸收能力。不同物质对同一波长的单色光有不同的吸收系数，吸收系数越大，表明吸光能力越强，灵敏度越高，所以吸收系数是物质定性和定量分析的依据。四、吸收光谱吸收光谱又称吸收曲线，是在浓度一定的条件下，以波长（λ）或波数（δ）为横坐标，以吸收度（A）为纵坐标所描绘的曲线。吸收峰最大

7、吸收波长λmax吸收谷最小吸收波长λmin肩峰λsh末端吸收续前λmax、λmin、λsh及整个吸收光谱的形状取决于物质的分子结构，可作为定性分析的依据。同一物质的吸收光谱应有相同的λmax、λmin、λsh；而且在相同浓度时，同一物质的吸收曲线应相互重合。第二节紫外-可见分光光度法一、基本原理物质分子受到紫外-可见光的照射，选择吸收某些适宜能量的光子后，其原子的外层电子（成键电子、未成键电子）由基态跃迁至激发态，在相应波长的位置出现吸收所形成的光谱，称为紫外-可见吸收光谱。适用范围：分子中含有芳环或

8、共轭双键的有机药物，在紫外光区有特征吸收外观有颜色的药物在可见光区有特征吸收都可用紫外-可见分光光度法进行分析。仪器可见分光光度计721型分光光度计仪器紫外-可见分光光度计一、基本组成光源单色器样品室检测器显示器1.光源在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在350～1000nm。紫外区：氢、氘灯。发射200～360nm的连续光谱。2.单色器将光源发射的复合光分