微生物学第8章 微生物的生长与繁殖ppt课件.ppt

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1、第八章微生物的生长与繁殖1基本概念生长：细胞体积的增大；繁殖：细胞数量的增加；生长或称发育（development）是一个逐步发生的量变过程，繁殖(reproduction)是一个产生新的生命个体的质变过程。2主要内容1、微生物生长的测定2、微生物的群体生长规律3、影响微生物生长的因素4、微生物的培养方法31、微生物生长的测定在微生物学中提到的“生长”，一般均指群体生长，这一点与研究其他生物时有所不同。个体计数：显微计数法、比浊法、平板计数法、液体稀释法、膜过滤法。测生长量：测体积、群体重量、比浊法、生理指标法。4测定微生物生长的意义：1、评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影

2、响；2、评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制(或杀灭)作用的效果；3、客观地反映微生物生长的规律。5显微计数法①常规方法：采用细菌计数板或血球计数板，在显微镜下对微生物数量进行直接计数（计算一定容积里样品中微生物的数量）。缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察。67②染色涂片法当样品中菌数很低时，可以将一定体积样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上（或一定面积中）的细菌数。采用特定的染色技术也可分别对活菌和死菌进行分别计数。8活菌计数法①平板菌落计数法涂布法：将菌液稀释后，加入固体

3、培养基平板上，使用涂布棒使之均匀分散，培养一定时间后，测定菌落形成单位（colonyformingunit,CFU）。倾注平板法：将菌液稀释后，加入45-50℃的固体培养基中，倾注平板，培养一定时间后，测定菌落形成单位。9DilutionResults10倾注平板法和涂布法比较1、样品充分混匀2、涂布或倾注平板涂布法不易使菌落均匀3、培养、计数倾注平板法在培养基内形成小菌落，影响计数。11平板上的菌落12全自动菌落计数仪13②液体稀释法，又叫MPN法（Themostprobablenumbermethod）对未知样品进行10倍系列稀释，然后根据估算取3个连续的稀释度平行接种多支试管

4、，对这些平行试管的微生物生长情况进行统计，长菌的为阳性，未长菌的为阴性，记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查MPN表，根据样品的稀释倍数计算出其中的微生物数目。适用于测定在一个混杂的微生物群中虽不占优势，却具有特殊生理功能的类群，如：硝化细菌、纤维素分14解菌、固氮菌等。14MPN表15③膜过滤法当样品中菌数很低时，可以将一定体积的液体样品通过膜过滤器，然后将将膜转到相应的培养基上进行培养，对形成的菌落进行统计。1617④比浊法比浊法是实验室和工业生产中使用最多的方法之一。在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度（即O.D值）表示菌量。实验测量时应控制在菌浓度与光密度成正比的线

5、性范围内，否则不准确。1819测生长量法①重量法以干重、湿重直接衡量微生物群体的生物量；测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法20②生理指标测定法含氮量法：通过样品中蛋白质含量的测定间接推算微生物群体的生物量；(一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%，根据一定体积培养液中的含氮量再乘以6.25，就可测得粗蛋白的含量。)含碳量法DNA含量测定测某种特征性代谢物：产酸、产气21细菌研究中常用的三个参数繁殖代数（n）指数生长方式：1248……2n设接种时细胞数为x1,时间为t1,到时间t2后，繁殖n代，细胞数为x2，它们之间的相互关系为：x2=x1*2n以对数

6、表示：㏒x2=㏒x1+n㏒2㏒x2-㏒x1∴n==3.322(㏒x2-㏒x1)㏒2生长速度常数（R）n㏒x2-㏒x1R==t2–t1t2–t1代时(G)1t2–t1G==R3.322(㏒x2-㏒x1)2、微生物的群体生长规律生长曲线（GrowthCurve）将一定量的纯种单细胞微生物接种到适宜的定量液体培养基中，在适宜的条件下培养，定时取样测定细胞数量，以培养时间为横座标，以菌数的对数为纵座标作图，可得到一条反映该微生物群体生长规律的曲线。真菌的生长过程也可以用生长曲线绘制出来，但是和细菌的生长曲线相比较，略有不同。其纵坐标是真菌的细胞数或重量。24根据微生物的生长速率常数（即每小

7、时的分裂代数）的不同，把典型生长曲线分为延滞期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个生长时期。25延迟期（Lagphase）也称延滞期、适应期。将少量菌种接入新鲜培养基后，在开始一段时间内菌数不立即增加，或增加很少，生长速度接近于零。（1）特点分裂缓慢、菌数略有增加、对不良条件敏感、细胞形态变大或增长、细胞处于活跃生长中，只是分裂迟缓。在此阶段后期，少数细胞开始分裂，曲线略有上升。26（2）出现原因微生物接种到一个新的环境，暂时缺乏分解和催化有关底物的酶，或是缺乏充足的中间