微生物灭菌常用的方法.doc

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1、常见的微生物灭菌方法　　高压蒸汽灭菌　　高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。　　灭菌方法　　1.首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。　　2.放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通

2、而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。　　3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。　　4.用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用1.05kg/cm2，121.3℃，20分钟灭菌。　　5.灭菌所需时间到后，切断电源

3、或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。　　6.将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。　　紫外线灭菌　　紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长为200~300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时

4、间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制。　　1.单用紫外线照射　　(1)在无菌室内或在接种箱内打开紫外线灯开关，照射30分钟，将开关关闭。　　(2)将牛肉膏蛋白胨平皿盖打开15分钟，然后盖上皿盖，置37℃培养24小时。共做三套。　　(3)检查每个平皿上生长的菌落数。如果不超过4个，说明灭菌效果良好，否则，需延长照射时间或同时加强其他措施。　　2.化学消毒剂与紫外线照射结合使用　　(1)在无菌室内，先喷洒3~5%的石炭酸溶液，再用紫外线灯照射15

5、分钟。　　(2)无菌室内的桌面、凳子用2~3%来苏尔擦洗，再打开紫外线灯照射15分钟。　　(3)检查灭菌效果。　　由于紫外线对眼结膜及视神经有损伤作用，对皮肤有刺激作用，所以，不能直视紫外线灯光，更不能在紫外线灯光下工作。