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1、分离分析法导论IntroductiontoChromatography色谱法概述■色谱法(Chromatography)溯源–100多年前俄国植物学家Tswett(茨维特)分离植物色素时采用的实验方法–他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直立玻璃管,再加入石油醚使其自由流下,结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带–Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描述他的实验方法，即现在的Chromatography(色谱法)Tswett色素分离实验■A一根长玻璃管填充碳酸钙的颗粒■B将碾碎之植物叶片的提取液灌入柱中■C随着石油醚提取液向下流过柱子，现出展宽的色带A
2、BC■1952年马丁(ArcgerMartin，1910—)英国人辛格(RichardSynge，1914—)英国人，发明分配色谱法■1938年R．库恩(RiehardKuhn，1900—1967)德国人，利用Tswett的方法研究类胡萝卜素和维生素色谱法与诺贝尔奖的关系年代获奖学科获奖研究工作1937化学类胡萝卜素化学，维生素A和B1938化学类胡萝卜素化学1939化学聚甲烯和高萜烯化学1950生理学、医学性激素化学及其分离、肾皮素化学及其分离1951化学超铀元素的发现1955化学脑下腺激素的研究和第一次合成聚肽激素1958化学胰岛素的结构1961化学光合作用时发生的化学反应的确认197
3、0生理学、医学关于神经元触处迁移物质的研究1970化学糖核苷酸的发现及其在生物合成碳水化合物中的作用1972化学核糖核酸化学酶结构的研究1972生理学、医学抗体结构的研究色谱法与诺贝尔奖的关系■效率高。上百种性质类似的化合物可在同一色谱柱上得到分离，复杂样品分析。■速度快。几分钟至几十分钟完成复杂样品的分析。■灵敏度高。直接检测纳克级，预浓缩可达皮克级。■用量少。一次分析只需数纳升至数微升的溶液样品。■选择性好。选择分离模式和检测方法，只分析感兴趣的部分。■同时分析。短时间内可以实现几十种成分的同时分离与定量。■易于自动化。从进样到数据处理的全自动化操作。■定性能力较差。已经发展色谱法与其
4、他分析技术联用。色谱法特点■色谱法的原理–是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,分配,吸附等化学作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离–两相中有一相是固定的,叫作固定相(StationaryPhase),有一相是流动的,称为流动相(MobilePhase),流动相又叫洗脱剂,溶剂■相(Phase):–物理化学术语,特指在某一系统中,具有相同成分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。各相之间有明显可分的界面色谱法原理色谱法的分类（1）■按流动相的物态分:–气相色谱(GasChromatography,GC)用气体作为流动相(又叫载气)
5、–液相色谱(LiquidChromatography,LC)用液体作为流动相(又叫洗脱剂)■按操作形式分:–平面色谱纸色谱薄层色谱–柱色谱色谱法的分类（2）■按分离原理分类:–吸附色谱(AbsorptionChromatography)根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离–分配色谱(PartitionChromatography)分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度(分配系数)不同–离子交换色谱(IonExchangeChromatography)根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简称离子色谱(IC)–体积排除色谱(SizeExclusionChro
6、matography)GPC(GelPermeationChromatography)–固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂GFC(GelFiltrationChromatography)–固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液色谱图及色谱常用术语■色谱图(Chromatogram):色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图,其纵坐标为信号强度,横坐标为时间峰高色谱峰时间对羟基苯甲酸甲酯；2.对羟基苯甲酸乙酯；3.对羟基苯甲酸丙酯；4.对羟基苯甲酸丁酯1234基线、色谱峰、峰高基线是在正常实验操作条件下，没有组分流出，仅有流动相通过检测器时，检测器所产生的响应值。稳定的基线是
7、一条直线，若基线下斜或上斜，称为漂移，基线的上下波动，称为噪音。漂移噪音色谱峰的面积峰面积色谱峰的宽度色谱峰的宽度死时间t0：不被固定相滞留的组分，从进样到出峰最大所需的时间。保留时间tR：组分从进样到出峰最大之所需的时间。死体积V0：不被固定相滞留的组分，从进样到出峰最大之所需的流动相的体积。保留体积VR：组分从进样到出峰最大之所需的流动相的体积。调整保留时间tR’tR’=tR-t0调整保留体积
