山楂叶中黄酮类提取工艺与质量标准的研究.doc

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1、山楂叶中黄酮类提取工艺与质量标准的研究一、实验目的1掌握从山楂叶中提取总黄酮的原理、方法及操作要点。2掌握正交试验的原理及方法。3掌握UV含量测定、TLC的原理和方法。二、实验原理利用正交试验法筛选最佳提取工艺，以总黄酮量为指标，芦丁为对照品进行含量测定，以得出的最佳工艺做验证实验，TLC的结果做质量标准的研究。三、材料与仪器材料：山楂叶、芦丁标准品、聚酰胺板试剂：95%乙醇、甲酸、NaOH、NaNO2、Al(NO3)3、AlCl3仪器：UV2550紫外可见分光光度计(日本岛津)、循环水式真空泵、旋转蒸发仪、抽滤装置、圆底烧瓶、冷凝管、层析缸、电子天平四、实验步骤1山楂叶总黄酮的提取用剪

2、刀将干燥的山楂叶剪碎，准确称取5.0g置于烧杯中，称取9份用来做正交试验，根据正交试验要求加入一定浓度、体积的乙醇回流提取一定时间。趁热抽滤，用50ml50%乙醇洗涤，合并滤液，减压浓缩至体积小于100ml，用60%乙醇定容至100ml，作为待测液。2标准曲线的制备将芦丁于120℃干燥至恒重，精密称取芦丁标准品9.28mg，用60%乙醇溶解，定容于50ml，得浓度为0.186mg/ml芦丁标准液。准确吸取芦丁标准液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml于25ml容量瓶中，每瓶加去离子水至6ml，加5%NaNO2溶液1ml，摇匀，放置6min后加入10%Al(NO3)3溶液1ml，

3、摇匀，放置6min后加入4%NaOH溶液10ml，去离子水定容，摇匀，15min后于500nm处测定吸光度A，得芦丁含量与A之间的回归方程。3山楂叶总黄酮的测定准确吸取待测液0.4ml于25ml容量瓶中，步骤同上，测定其在500nm处吸光度，计算每组山楂叶中总黄酮含量。算出正交试验中的K和R值，从而得出最佳工艺。4验证实验根据最佳工艺，做验证实验，提取、含量测定方法如上。5TLC鉴定吸附剂：聚酰胺板展开剂：乙醇-甲酸-水（4:0.01:1v/v/v）以最佳工艺提取出的溶液为供试品溶液，另取配好的芦丁对照品溶液各2-3μl，分别点于同一聚酰胺板上，以乙醇-甲酸-水（4:0.01:1v/v/

4、v）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。五、实验结果1标准曲线芦丁体积/ml吸光度A123450.0650.1470.2190.3060.3562正交试验水平A乙醇浓度B浸提温度C浸提时间D料液比/%/%/hg/ml1505011:10260601.51:153707021:20实验号ABCD总黄酮量/mg11111318.5421222336.0731333510.1542123479.4752231449.4162312471.9573132451.9283213418.7393321414.97K11164.761249.9312

5、09.221182.92K21400.831204.211230.511259.94K31285.621397.071411.481408.35R236.2192.86202.5225.6由上图可得:影响山楂叶总黄酮提取率的因素由大至小排列顺序为A、D、C、B、,每个因素各水平之间大小排列为：A2>A3>A1、D3>D2>D1、C3>C2>C1、B3>B1>B2，则最佳工艺为A2B3C3D3.3验证实验根据最佳工艺，60%乙醇回流提取2h，料液比1：20，进行验证实验，步骤同上，计算总黄酮量=557.1mg，计算每克山楂叶中总黄酮量为11.1%。4TLC结果吸附剂：聚酰胺板显色剂：2%氯

6、化铝甲醇溶液展开剂：乙醇-甲酸-水（4:0.01:1v/v/v）六、实验讨论1因为水浴锅控温不准确，所以去掉了正交试验中的提取温度这一因素，就成了3水平3因素了。2抽滤时速度很慢，换大号的布氏漏斗或者在滤纸上加一层纱布，抽滤速度明显加快。3TLC结果显示，山楂叶中没有芦丁,但是有黄酮类化合物。