重金属胁迫培养对两种细菌生长曲线的影响.docx

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1、重金属胁迫培养对两种细菌生长曲线的影响以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌两种典型细菌为实验材料，采用传统培养方法，选择五种重金属离子：Cu2+、Hg2+、Pb2+、Cd2+、Cr6+在不同浓度下对其进行胁迫培养，通过测定两种细菌的生长曲线，探究外源性重金属对两种细菌生长的影响。 材料与方法 1.1供试菌种 革兰氏阴性（G-）代表菌种大肠杆菌 Escherichia coli     革兰氏阳性（G+）代表菌种枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 1.2培养基 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌均采用LB培养基 1.3方案设计 1.3.1扩大培养 将活化后的斜面菌种

2、用5ml无菌水洗脱于装有200mlLB液体培养基的锥形瓶中，置于摇床（180r/min）上恒温（35℃）预培养24h。胁迫培养      配制LB液体培养基，分别添加PbCl2（A.R），CdCl2（A.R），K2Cr2O7（A.R）, HgI2（A.R），CuSO4（A.R），使Pb2+、Cd2+、Cr6+、Hg2+、Cu2+浓度梯度为5、10、15、20、30、40、50、80和100mg.L-1 (以纯Pb2+、Cd2+、Cr6+、Cu2+和 Hg2+计)，另以不含任何重金属离子的LB液体培养基作对照，将预培养的菌液按10%的接种量分别接种于上述培

3、养基中，置于摇床（180r/min）上恒温（35℃）摇瓶培养。 1.3.3生长曲线测定 培养过程中每隔2h用紫外光栅分光光度计，于600 nm 波长测其光密度，绘制不同微生物在不同浓度重金属胁迫后的生长曲线。材料酵母提取物，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/LNaOH，1mol/LHCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。称量按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时

4、严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。3．调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则

5、用1mol/LHCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。4．分装(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。5．加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。6.包扎加

6、塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。7．灭菌将上述培养基以1.05kg/cm2（15磅/英寸2），121.3℃，20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。8．搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。9．无菌检查将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48

7、小时，以检查灭菌是否彻底。