菌种活化保存法.doc

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1、附件：新菌株（乳酸菌）斜面培养法1.购买新菌株（安瓿瓶装冻干粉）2.菌种管开启方法一：按购买菌种上的说明进行操作即可。3.菌种管开启方法二（本次实验方法均在水平层流台进行）：3.1水平层流台开启风机跟紫外灯，半个小时3.2用浸过75％酒精的脱脂棉擦净菌种管。3.3将菌种管顶端在火焰上加热，注意避免直接加热菌体或加热过度。3.4将无菌水滴至加热过的菌种管顶端，使玻璃开裂。3.5用锉刀或镊子敲下已开裂的菌种管的顶端。4.用玻璃三角瓶121.0℃灭菌约10-30ml的生理盐水20分钟5.将开封后的冻干粉倒入生理盐水中，摇匀6.用接种环

2、沾取生理盐水，转接与MRS培养基平板上，在36.5℃中恒温培养48-72小时后，得到二代菌。7.此时可以使用二代菌进行菌株扩大培养，或对其进行保存菌种。注意事项：1菌种活化前，请将冻干菌种管冷藏保存在5℃-10℃环境下。3菌种经过冷冻干燥后，生长延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。4菌种活化及使用过程应做好安全防护工作。第二代第2代)观察是否具有典型的菌落形态,然后挑取单一的纯菌落,进行革兰染色、镜检,观察其染色特征及菌体形态,并进一步做生化鉴定实验以确定菌种。第三代为工作用菌。乳酸菌菌种保存法方法一：斜面保存法（略）方

3、法二：20%甘油保存法器材：冻存盒、冻存管(2ml装)、甘油（丙三醇）、MRS肉汤培养基、1ml移液器及枪头、酒精灯、水平层流台、高压灭菌锅操作步骤：1.在水平层流台中用接种环挑取所需保存的的菌株放于灭菌过的MRS肉汤培养液，进行36.5℃恒温培养48小时2.配制40%的甘油，用移液器移取0.5ml于冻存管中，放于冻存盒3.用报纸将冻存盒包扎好，放于灭菌锅中灭菌（121.0℃、20Min）4.在水平层流台中，用移液器移取0.5ml培养后的MRS肉汤培养液加入到冻存管中，拧紧盖子，摇匀，标识。5.在冻存盒外也做好操作人，日期，所保

4、存的菌种等信息标记6.将冻存盒放于保鲜袋中，放入冰箱的冷冻室层进行保存，一般可以保存至两三年。7.若是需用，那一冻存管样进行培养即可。实验室菌种激活方法1.配制少量的液体MRS培养液（约50ml），灭菌后，冷却后，在水平层流台里，倒入一管冻存管菌种，摇匀，置于36.5℃恒温培养一到两天，然后用此培养液划平板，再从平板里挑单菌落，即可。