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1、正丁醇部位的分离一向是分离工作中的难点，但由于其出新率远高于小极性部位，所以还是值得下一番功夫的。一般来说，正丁醇部位往往含有单糖、二糖等小分子糖，多种酚类化合物，以及苷类化合物，极性较大，在硅胶柱上吸附较多，成点性差，分离效果不好。因此，一般说来，对于正丁醇部位可采取以下方法：1.大孔树脂柱分段。水溶后上样，依次用水，30%、60%、95%乙醇溶液洗脱，分别合并、收集。一般说来目标化合物多在60%段，水，30%段多为一些水溶性单糖、二糖及多酚类化合物，可以考虑弃去。而95%部分多和乙酸乙酯部位大极性段重叠，可以乙酸乙酯部位合并处理。2.反相硅胶分段
2、。如果正丁醇部位量不是太大，或者课题组有大反相柱，可以考虑用反相柱砍段。唯一需要提醒注意的是，由于我们一般是用正相硅胶板检测化合物分离情况，所以反相柱砍段后往往各组份在硅胶板上看起来比较混乱，不如硅胶柱砍段后那么直观，一定要小心对比，否则会越分越乱。3.正相柱分配色谱层析。如果正丁醇部位量太大，或者课题组没有大的反相柱用来分段，那么可以考虑氯仿：甲醇：水体系来砍段。我一般用8：2：1、7：3：1以及6.5：3.5：1依次洗脱，效果不会很好，但两到三次反复上柱后各部分还是可以看得到点的。这时再会反相柱细分，拿十到二十个点应该没问题的。正丁醇在提取分离这
3、一块是难度最大1.正丁醇层部分极性大，容易变化，譬如，皂苷类发生水解，变成次级皂苷和苷元。2.化合物稳定性差，容易变化，往往导致重复性差，譬如，上柱子前可以看见一个很好的点，准备分离这个目标点，但是从柱子上下来以后，点比上柱子前还多。3.薄层条件难于摸索，一般用到氯仿甲醇水系统，但是，这不是绝对的，有时候，展开系统就难于选择了，比如，极性最小三相氯仿甲醇水系统中的一般最小的是9：1：0.1，但是如果用这个比例还是展到了最上面，你肯定想把极性调小，比如，换成20：1，或者是15：1，跑出来就是一条线，想往其中加水，但是水加多少呢？加多了，三相就变成分层
4、的了，1％不算多吧，可是，还是分层，真是不好处理。4.溶解性也不好，遇到一些东西，说什么也不溶解，实在没有办法，有时候1克的东西，全部溶解都需要50-80ml的溶剂，你想想用这么多的溶液来拌样，是个什么样的工作量，推荐系统有：氯仿甲醇水系统，正丁醇醋酸水系统，乙酸乙脂甲醇水系统，分极性大的部分，不能拘泥于硅胶柱，应结合多种色谱分离手段，应多尝试用ODS柱，凝胶柱，还可以考虑制备薄层，有时此法效果极其好，有条件的可以考虑制备液相进行分离可以先考虑用树脂，甲醇-水系统然后再用硅胶，氯仿-甲醇-水然后再用别的方法进一步分离运气好的时候从甙元到糖都能得到一篇
5、文献的一部分Then-BuOH-solublefractionwasseparatedfirstbycolumnchromatographyonahighlyporoussyntheticresin,DiaionHP-20(¼)5.0cm,L)60cm)(MitsubushiChemicalCo.,Ltd.,Tokyo,Japan),withMeOH-H2O[(1:4,8L),(2:3,8L),(3:2,8L),and(4:1,8L)];500mLfractionswerecollected.Theresidue(26.6ginfractions13
6、-18)ofthe40%MeOHeluateobtainedonDiaionHP-20columnchromatographywassubjectedtosilicagel(500g)(70-230mesh;MerckCo.,Ltd.,Darmstadt,Germany)columnchromatographywithCHCl3(2L)andCHCl3-MeOH(99:1,3L),(49:1,3L),(97:3,3L),(24:1,3L),(19:1,3L),(47:3,3L),(23:2,3L),(9:1,4.5L),(7:1,4.5L),(17:
7、3,4.5L),(33:7,3L),(4:1,3L),(4:1,3L),and(7:3,3L),fractionsof500mLbeingcollected.Theresidue(2.26ginfractions35-41)ofthe6%MeOHeluatewasseparatedbyreversed-phasesilicagel(Cosmosil)columnchromatographytogive1.14gofaresidue,whichwasthenpurifiedbyDCCCtogive563mgofaresidueinfractions17
8、5-232and313mgof6infractions233-261.Theformerwaspurifie
