微生物初级考试细菌部分.doc

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1、/霍乱弧菌（肠道菌疾病检验—肠道属）1．概述：（1）霍乱是急性肠道传染病，剧烈的无痛性水样腹泻（2）霍乱主要由01群的古典型和ElTor型以及()139群菌株引起。（3）()1群称凝集弧菌，非()1群为不凝集弧菌。()1群依菌体中主要抗原成分A、B、C组分分为不同亚群。各称为小川型(含A、B抗原)、稻叶型（含A、C抗原）和彦岛型(含A、B、C抗原)。（4）()139群最早出现于1992年东南亚。①0139群和()1群ElTo()抗原不同；②有相同的霍乱毒素基因，对()抗原的免疫血清两者无交叉凝集，o139独特特点是：有荚膜多糖，国

2、际标准株为M045。霍乱弧菌不侵入上皮细胞，在人的小肠内定居、增殖，释放霍乱毒素。霍乱毒素为A、B两种亚基组成，每个毒素分子A：B数量比为1：5，A又分为A1和A2，毒素酶活性部分在A1亚单位。霍乱毒素通过其B亚单位与人小肠上皮细胞上的GMl受体结合，用GMl—ELISA（酶联免疫吸附实验）可检测霍乱毒素存在。兔小肠段结扎试验也可用来检测霍乱弧菌是否产生霍乱毒素。霍乱弧菌引起的肠道局部黏膜免疫是霍乱保护性免疫的基础。针对菌体产生的抗菌免疫以及针对霍乱毒素的抗毒免疫是对霍乱免疫的因素。2．分离培养与鉴定显微镜下呈逗点状或弧形，经人工

3、培养传代后，镜下观察呈类似大肠杆菌的杆状。庆大霉素琼脂、4号琼脂培养基为强选择性培养基，碱性琼脂、碱性胆盐琼脂等为弱选择性培养基。在庆大霉素琼脂平皿上的菌落形态：带灰色、半透明、圆形扁平稍隆起、菌落边缘湿润。河水、池塘水等外环境水进行霍乱弧菌分离，采集33．3cm以内的表层水，先用lmol/L的Na()H将水样pH值调整到8.4—9.2。碱性蛋白胨水37℃增菌6—8小时后，霍乱弧菌在培养液的上层增殖最多。碱性蛋白胨水可用作霍乱弧菌的运输保存培养基。V—P试验和第Ⅳ组霍乱噬菌体裂解试验可作为区分()1群古典型与ElTor型菌株的参考

4、指标。对0139群霍乱弧菌，则可用特异的诊断血清。3．（噬菌体型为1～6且生物型为a至f的为流行株）对于霍乱弧菌流行株与非流行株的噬菌体—生物分型试验，最少用两平皿两试管来完成。区分流行株与非流行株的溶血试验中所用的红细胞为绵羊红细胞。溶原性测定试验中用双层琼脂法，其中上层半固体琼脂的浓度为o.7％。山梨醇发酵实验，接种pH8．0的山梨醇发酵管后37℃培养3小时。流行株对山梨醇为慢发酵。生化反应：分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、产酸不产气。迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。氧化酶、明胶酶试验和ONA酶试验均阳性。产生靛基质，霍乱红反

5、应（即亚硝基靛基质试验）阳性。(二)副溶血弧菌检验嗜盐性弧菌，已确定有12种不同的()抗原和约60种不同的K抗原。致病菌株能产生的耐热直接溶血素和不耐热溶血素是副溶血弧菌的主要致病物质。检验方法：（1）标本采集：患者的粪便、可疑食物。（2）分离培养：称取样品25g，加225ml3.5％灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化钠琼脂平板和嗜盐再菌选择性琼脂平板各1个，同时取10ml，加入100ml增菌液中（40g/LNaCl），放37℃8～16小时培养后，进行平板分离，于37℃18—24小时培养后取出观察。（3）挑取上述可疑菌落

6、，转种3.5％氯化钠三糖铁斜面，37℃、24小时观察结果。（4）涂片镜检：将三糖铁培养基反应可疑者(底层变黄，葡萄糖产酸不产气，斜面不变，乳糖蔗糖不分解，有动力，不产生硫化氢)进行涂片革兰染色镜检形态。①形态染色：革兰阴性杆菌，随培养基不同菌体形态差异较大，多种形态。两极浓染。菌体一端有单鞭毛，运动活泼。无芽孢、无荚膜。②培养特性：营养要求不高，在普通培养基中加入适量NaCl即能生长。最适浓度为35g/LNaCl，生长所需PH7.0～9.5，最适PH7.7。需氧，在液体培养基表面形成菌膜。在厌氧环境下生长较慢。①在35g/LNaC

7、l琼脂平板上呈蔓延生长，菌落边缘不整齐，凸起、光滑湿润，不透明；②在副溶血弧菌专用选择培养基上形成1~2.5mm，稍隆起、浑浊、无粘性、绿色菌落；③在SS平板上不生长或长出1~2mm扁平无色半透明的菌落，不易挑起，挑起时呈粘丝状。④在羊血琼脂平板上，形成2~3mm圆形、隆起、湿润、灰白色菌落，某些菌株形成β溶血或α溶血⑤在TCBS琼脂（副溶血弧菌专用选择培养基）上不发酵蔗糖，菌落绿色。③生化反应：所有用于该菌的生化反应（副溶血弧菌）培养基需加入30g/LNaCl。本菌（副溶血弧菌）在70g/LNaCl培养基生长，在无盐或10%Na

8、Cl以上培养基不生长。能分解葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、淀粉产酸不产气，不分解乳糖、蔗糖；靛基质，甲基红试验阳，V-P、H2S、尿素酶试验阴性；致病菌株能使人或兔红细胞发生溶血，对马红细胞不溶血，称神奈川试验阳性。动物试验将上述各类反应的副溶血性弧菌接