体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则

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1、附件2：体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则——发光免疫分析试剂生产及质量控制技术指导原则发光免疫分析试剂是指利用特异的抗原抗体反应等生物学原理，利用发光信号来进行检测的一类试剂。主要包括化学发光（酶促、非酶促），电化学发光和时间分辨荧光等法。该指导原则主要适用于用发光分析技术对蛋白质等被测物质进行检测的第三类试剂生产及质量控制。第二类试剂的生产及质量控制可参考该指导原则执行，国家食品药品监督管理部门将依据科学技术发展的需要，适时组织修订。一、基本原则（一）研制、生产用的各种原料、辅料应当制定相应的

2、质量标准，并符合有关法规的要求。（二）诊断试剂的生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》；同时，生产企业应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行；生产企业还应该通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。（三）诊断试剂的研制应当按照科学、规范的原则组织研发，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。（四）研制生产过程中所用的材料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全

3、性方面的事宜。（五）生产和质量控制总体目标应保证产品使用安全，质量稳定，工艺可控，使用有效。二、原材料质量控制（一）主要生物原料与生产的产品质量最密切相关的生物原料包括各种活性抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科。这类原料可用于包被酶标反应板、标记相关酶（辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）、中和反应用抗原或抗体、制备校准品（标准品）等。一般按工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以保证其达到规定的质量要求。原料供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果主要原料（包括工艺）或其

4、供应商有变更，应依据国家相关法规的要求进行变更申请。主要生物原料的常规检验项目一般包括：1．外观肉眼观察，大部分生物原料为澄清透明的液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒；或者为白色粉末，不含有其他颜色的杂质；特殊生物原料应具备相应外观标准。2．纯度和分子量主要经SDS-PAGE电泳后，利用电泳扫描仪进行分析，也可用其他适宜的方法，如高效液相法等。根据所检测生物原料的分子量选择适宜丙烯酸胺凝胶浓度进行电泳。一般情况下，每个电泳道加样量为5μg，同时用已知分子量的蛋白标准品作参照，采用合适的电泳电流，

5、电压和电泳时间；电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染色。染色后的凝胶用电泳扫描仪分析原料的纯度和分子量，纯度应达到相应的质量标准，分子量大小应在正确的条带位置。3．蛋白浓度蛋白浓度可通过Lowry法、280nm光吸收法、双缩脲方法等进行检测。4．效价效价的测定一般根据蛋白含量测定结果，通过倍比稀释法进行。效价应达到规定的要求。5．功能性实验功能性实验是指生物原料用于试剂盒实际生产中的情况，一般考查使用该原料的试剂的灵敏度、特异性和稳定性等，并比较其与上批次原料的相关性。（二）生物辅料生物辅料指的是

6、在生产过程中作为蛋白保护剂用途的一类生物原料、主要包括牛血清、羊血清、牛血清白蛋白等。这些生物原料的质量标准应符合2000年版的《中国生物制品主要原辅材料质控标准》上规定的标准要求，并且要适合于本企业的生产。建议作以下检验：1.牛血清或羊血清外观：为浅黄色呈稍粘稠的液体，无溶血或异物无菌试验：将血清直接放37度培养7天，放在明亮处观察，不得出现混浊。总蛋白含量：用双缩脲方法来测定，标准为不小于32mg/ml。球蛋白含量：取待测血清1ml，加入0.85%的NaCl溶液。加入饱和硫酸铵1ml，置4℃，2小

7、时，8000rpm离心10分钟，弃上清。沉淀溶于0.85%NaCl溶液，至1ml，用Lowry方法测定蛋白含量，不能大于2mg/ml。2.牛血清白蛋白：外观：应为浅黄色冻干粉末无吸潮，无结块，无肉眼可见的其它杂质颗粒。溶解性：将牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解时间在18-26度时应不大于15分钟。1%水溶液的ｐＨ值应为6.5~7.1。总蛋白含量：用双缩脲方法来测定，质量标准为大于等于95％。总蛋白中的BSA含量：采用硝酸纤维素膜电泳法，其标准为≥95%。BSA的净含量：总蛋白含量乘总蛋白中的BSA含量

8、，其标准为≥90%。3.酪蛋白：酸度应符合生产所需的质量标准。4．标记用酶应在产品的质量标准中明示所使用的标记用酶的名称（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等），同时应根据不同生产厂家的检验方法和质量标准进行检验，酶的纯度RZ值（OD403nm/OD280nm）应大于3.0。对于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，还应进行功能性实验，即以其为原料配制一定浓度的稀释液作为样品，进行测定，均不得出现非特异性反应。生物辅料的供应商同样要求相对固定，不得随意