植物总dna提取方法

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1、植物总DNA提取方法赵红（山东师范大学生命科学学院）摘要：利用液氮研磨植物幼芽，以苯酚——氯仿——异戊醇——核糖核酸酶法提取了大豆、菜豆、玉米等几种作物的总DNA。所提取的DNA经紫外线分光光度计(牌子未知)检测及0.8%的琼脂糖凝胶电泳，结果证明：该方法提取的植物总DNA纯度高，片段长度整齐，约有50Kb左右，并且DNA收率很高。关键词：DNA提取；纯度；收率近几年来，外源总DNA通过花粉管道直接导入农作物在多种植物上得到广泛的应用【1.2.3】，我们采用外源DNA直接导入大肠杆菌多年，该技术对DNA纯度有很高的要求。都必须要

2、求提高纯度和大小要求整齐度。本文将讲述利用苯酚——氯仿——异戊醇——核糖核酸酶法提取几种植物总DNA的方法及其结果。材料和方法（一）大豆、菜豆、玉米等3种作物共约30份材料。（二）提取方法1、取暗发芽的植物幼芽30g,在液氮预冷的研钵中与液氮混合研磨成粉末状,加30ml提取缓冲液[4],0.65℃水浴30分钟,冰浴分钟。2.加等体积的饱合苯酚,轻轻摇匀,-20℃冰箱冻存5一10分钟,4000r/min离心5分钟,吸出水相。3、加等体积苯酚一氯仿一异戊醉（25：24:1）,摇匀,4000r/min离心5分钟,吸出水相。4、加等体积

3、氯仿一异戊醇,摇匀,4000r/min离心5分钟,吸水相。5、约2倍体积的预冷无水乙醇沉淀DNA,用玻璃棒绕出或离心沉降,得到DNA粗制品,略凉干。6用0.1*SSC将沉淀的DNA溶解后加1/10体积的10*SSC,使其最终浓度达1*SSC,JIARNA酶，使酶的最终浓度达50一75微克每毫升37℃水浴保温40分钟。7、重复2、3、4程序。8、加2.5倍体积的预冷无水乙醇沉淀DNA,离心DNA沉降,弃去上清液,略凉干,得到精制DNA。9、用0.1*SSC溶解后,加1/10体积的10*SSC。然后用紫外分光光度计检测所提取的DN

4、A纯度及收率,用0.6%的琼脂糖凝胶电泳检测其片段长度是否整齐一致.。结果1、该方法与氯仿一异戊醇法所提取的这几种作物DNA经紫外分光光度计检测结果如表格从表可以看出：本方法所提取的几种作物DNA均为A260/A230>2.0；A260/A280>1.8,表明DNA纯度符合质量标准，蛋白质含量不超过0.3%，（标准纯度中蛋白质0.2—0.5%），而第二个表格所示用氯仿——异戊醇法提取的DNA多数不符合标准。2、该方法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测，其片段长度为50Kb左右，可见提取效果很好，片段长度大小一致，RNA以去除干净，

5、并且没有DNA大量降解的情况。3、DNA的收率，经紫外分光光度计的260nm处得光吸收值可以计算出DNA收率=（O.D260/0.02/L*稀释倍数*原液体积L为比色杯首都；0.02为每毫升溶液中含1微克DNA钠盐时的光密度；O.D260为260纳米波长时光密度读数。经此公式计算该方法提取的DNA均在80---100微克每克植物幼芽鲜重。经紫外分光光度计的扫描结果可以看出是明显的DNA紫外吸收特征【5】讨论1、本实验采用饱和苯酚—异戊醇去除组织蛋白，其效果比单纯氯仿异戊醇去除组织蛋白好得多。主要由于低温下饱和苯酚与组织蛋白结合使

6、其变形的能力远高于氯仿。2、提取的DNA片段长度一致，RNA去除干净，原因是提取过程中的操作要注意使各项能混合均匀，使苯酚、氯仿—异戊醇与DNA所在的水相能够充分接触即可，未必要剧烈震荡以防止DNA分子由于机械剪切而断裂。参考文献：1.     王亚馥，戴灼华，1999：遗传学（第二版），高等教育出版社。2.     刘祖洞，1994：遗传学（第二版），高等教育出版社。3.     孙乃恩，孙东旭，朱德熙，1990：分子遗传学，南京大学出版社。4.     韩贻仁，2001：分子细胞生物学（第二版），高等教育出版社。5.    

7、张玉静， 2000，分子遗传学，科学出版社。6.     陈仁彪，冯波，1994：医学遗传学，上海科学技术文献出版社。7.     王关林，方宏筠，2002：植物基因工程，科学出版社。8.     荆玉辉，匡廷云，李德保主编，1995：植物分子生物学，科学出版社。9.     林剑，1997：免疫遗传学，高等教育出版社。10.  罗鹏主编，1996：遗传学应用。11.  汤泽生，魏勇，程国忠，2002：质体遗传的数学模型与规律，四川科学技术出版社。12.  沈珝琲,方福德，1996：真核生物基因表达，高等教育出版社。13.  童

8、克中，1996：基因及其表达，科学出版社。