龙葵碱含量测定.doc

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1、实验名称农药残留量快速检测指导教师李天骄授课对象12食品实验地点食品分析实验室龙葵碱不溶于水、乙醚和石油醚，可溶于甲醇、乙醇、戊醇、丙酮等。对碱较稳定，pH大于8时沉淀。经稀酸水解后，可生成茄健和相应的糖(包括葡萄糖、鼠李糖和半乳糖)。在稀硫酸性环境下，与酸反应生成茄咙。茄咙在酸性环境中与甲醛溶液作用生成橙红色化合物，在一定范围内，颜色的深浅与茄咙含量成正比。可用分光光度计在520nm处测定。根据所用的有机溶剂种类和数量的不同，现有的主要方法可分为单溶剂法，双溶剂法和混合溶剂法等。混合溶剂法所需试剂较贵，同时试验过程中需要昂贵的仪器，使成本过高。双溶剂法的乙醇一乙酸法和

2、单溶剂法的甲醇法都有一定的优缺点，乙醇一乙酸法需要的时间比较长，而甲醇法使用的甲醇有毒，且准确度偏低。本试验利用单溶剂乙醇替代甲醇，结合乙醇一乙酸法的试验流程并改进，比较研究了乙醇法与乙醇一乙酸法提取马铃薯中龙葵碱的效果。1．材料与方法1.1试验材料马铃薯:取适量马铃薯，发芽处理。洗净，组织捣碎机捣碎，混匀。60℃烘干，植物样品粉碎机粉碎，备用龙葵碱标准品:a-茄碱，购于sigma公司，纯度)99.8%1.2仪器与试剂95%乙醇:AR，GB679-941%硫酸:量取5.65ml浓硫酸，缓缓注入冷水中，于I000ml容量瓶中定容，摇匀1%甲醛: 量取25ml的甲醛，加入冷

3、水中，于1000ml容量瓶中定容，摇匀浓氨水:AR，GB631-891%氨水: 量取45.5ml的浓氨水，加入冷水中，于1000ml容量瓶中定容，摇匀浓硫酸:AR冰乙酸:AR，GB676-90仪器：磁力搅拌器、水浴锅、脂肪提取器、紫外分光光度计、圆底烧瓶、直形冷凝管、电子天平(2009，0.lmg)、组织捣碎机、植物样品微粒粉碎机。2.提取分离方法乙醇法:称取20g的马铃薯鲜样品，将样品和几个玻璃珠(防止加热沸腾)放置于250ml的圆底烧瓶中，添加100ml的95%乙醇，将圆形烧瓶连接直形冷凝管，放置于水浴锅，调节温度为85-95℃，水浴4个小时。冷却，过滤取滤液，回收

4、乙醇近干，然后将剩余的乙醇倒入蒸发皿中，将乙醇蒸干。用30ml的5%硫酸溶解剩余物，过滤，收取滤液，加入浓氨水调节PH值为10-10.5，冷却，放置于冰箱过夜。4℃，5000r/min离心，去上清液，用l%氨水洗涤，再离心，洗涤，至洗涤液澄清，离心，取沉淀即得粗样品。乙醇一乙酸法:称取2g的烘干马铃薯鲜样品，加100ml乙醇和3ml乙酸，磁力搅拌器搅拌15分钟，过滤。滤液装入索氏脂肪抽提器的称脂瓶，滤渣用滤纸包住，放入索氏脂肪提取器的滤纸筒内，水浴抽提16小时后，回收乙醇近干，然后将剩余的乙醇倒入蒸发皿中，将乙醇蒸干。用30ml的5%硫酸溶解剩余物，过滤，收取滤液，加入

5、浓氨水调节pH值为10~10.5，冷却，放置于冰箱过夜。4℃，5000r/min离心，去上清液，用1%氨水洗涤，再离心，洗涤，至洗涤液澄清，离心，取沉淀即得粗样品。3.测定方法龙葵碱标准溶液:精确称取0.0500g龙葵碱，加入l%硫酸溶液溶解，移入50ml容量瓶中，加入1%硫酸溶液至刻度，摇匀。此溶液每ml含龙葵碱lmg。标准曲线的制作:取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml标准溶液以1%硫酸稀释到2ml，置冰浴中逐渐加入5ml硫酸(宜于3分钟以上时间滴完)，放置1分钟，然后置冰浴中滴加2.5mll%甲醛(在2分钟以上时间滴完)，放置90分钟后，于520nm波

6、长测定吸光度。样品的测定:将提取的粗样品用l%硫酸溶解，定容到10ml。取2ml的样品溶液，与标准曲线的制备同样操作，先预测其大概浓度，再以1%硫酸调节样品浓度，使之每毫升在0.2mg以下，取2ml按标准曲线制备项下操作，于520nm波长测定吸光度，计算含量。4.马铃薯中龙葵碱含量的计算公式X（mg/100g）=（P*V*50）/m式中X—100g样品中所含龙葵碱的量P—测定结果相应的标准浓度（mg/ml）V一样品提取之后定容总体积(ml)m一样品量(g)