马铃薯晚疫病菌生理小种鉴定技术规程.doc

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1、ICS点击此处添加ICS号点击此处添加中国标准文献分类号DB江西省地方标准DB36/XXXXX—XXXX马铃薯晚疫病菌生理小种鉴定技术规程Codeofpracticeforidentificationonthephysiologicalracesofphytophthorainfestanceonpotato点击此处添加与国际标准一致性程度的标识XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施江西省质量技术监督局发布DB36/XXXXX—XXXX目次前言II1　范围12　术语和定义13　接种体制备14　鉴别寄主的培育35　接种

2、鉴定36　病情调查37　生理小种的确定48　供试材料的灭活4附录A（资料性附录）　致病疫霉菌形态特征5附录B（资料性附录）　马铃薯晚疫病菌生理小种的命名方法66DB36/XXXXX—XXXX前言本标准编写规则符合GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定。本标准由江西省农业农村厅提出并归口。本标准起草单位：江西省农业科学院植物保护研究所。本标准主要起草人：何烈干、邹芬、马辉刚、涂玉琴、王美清、赖金美、朱业斌、朱跃冬、王修慧。6DB36/XXXXX—XXXX标准名称1　范围本标准规定了马铃薯晚疫病

3、菌采集分离纯化、生理小种室内鉴定的培养基的制备、鉴别寄主的培育、接种鉴定、病情调查、生理小种的鉴定、供试材料的高温灭活处理。本标准适用于马铃薯晚疫病菌的生理小种鉴定。2　术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1　马铃薯晚疫病指由疫霉属致病疫霉[Phytophthorainfestans(Mont.)DeBary]侵染马铃薯所引起的一种毁灭性病害。2.2　接种体用于人工接种鉴定所需的马铃薯晚疫病菌[Phytophthorainfestans]的孢子囊悬浮液。2.3　鉴别寄主一套含有主效抗性基因R1～R11和已知无R基因的感病

4、材料（r）的马铃薯品种。2.4　生理小种病原物种内或专化型内在形态上无差异，但在寄主植物的品种上具有显著致病性差异的类群。2.5　人工接种在适宜的条件下，通过人工操作将一定浓度马铃薯晚疫病菌的孢子囊溶液接种到马铃薯植株的适当部位使之发病的过程。2.6　离体叶片接种法使接种体与离体叶片接触以促使组织发病的一种鉴定方法。3　接种体制备6DB36/XXXXX—XXXX1.1　病样的采集在晚疫病发生较为严重的田块，选择具有典型症状的病叶随机采取5片，记录采集时间和地点，放入冰壶内1天内带回实验室进行分离，分离物经形态学鉴定（附录A）为

5、致病疫霉后，再进行分离物纯化和生理小种鉴定。1.2　培养基的制备1.2.1　黑麦培养基称取50g～60g黑麦，在蒸馏水中浸泡24h～36h，在121℃高压蒸汽灭菌锅中灭菌30min，取出用双层纱布过滤去渣，上清液补足水至1000mL，加入琼脂20g，用玻棒搅匀，经三角瓶分装好后在121℃下高压蒸汽灭菌20min。1.2.2　白云豆培养基称取白云豆粉60g，用50℃～60℃水浴1h～2h，双层纱布过滤后加入V8蔬菜汁100mL，琼脂粉20g，CaCO31.4g,加入蒸馏水定容至1000mL后在121℃下高压蒸汽灭菌20min。1

6、.2.3　选择性培养基在上述2种培养基中分别加入利福平20mg·L-1，氨苄青霉素200mg·L-1，70%五氯硝基苯100mg·L-1。1.2.4　MS培养基硝酸钾1900mg，硝酸铵1650mg，磷酸二氢钾170mg，硫酸镁370mg，氯化钙440mg，碘化钾0.83mg，硼酸6.2mg，硫酸镁22.3mg，硫酸锌8.6mg，钼酸钠0.25mg，硫酸铜0.025mg，氯化钴0.025mg，乙二胺四乙酸二钠37.25mg，硫酸亚铁27.85mg，肌醇100mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素0.1mg，盐酸吡哆醇0.5mg，烟酸0

7、.5mg，蔗糖30000mg，琼脂7000mg，蒸馏水1000mL，PH调至5.5。1.3　病原物的分离与纯化1.3.1　叶片保湿分离纯化法将具有典型症状的叶片在自来水下冲洗干净，然后用蒸馏水冲洗1遍，用滤纸吸取叶片表层的水分。用灭菌过的剪刀在病健交界处剪取3cm×3cm叶块，背面朝上置于0.5%～0.8%水琼脂培养基上保湿培养24h，然后用灭菌挑针挑取小块菌丝块，接种在选择性黑麦培养基上，把培养基放在16℃～18℃的生化培养箱中黑暗培养3d～4d后，在从菌落边缘挑取菌丝置于选择性黑麦培养基上，并放入16℃～18℃的生化培养箱

8、中黑暗培养纯化，备用。6DB36/XXXXX—XXXX1.1.1　块茎夹叶分离纯化法将健康的马铃薯块茎经表明消毒（将马铃薯表面浸入70%-75%的乙醇溶液后取出，用5%-20%NaClO溶液表面消毒5min-10min,用无菌水冲洗3遍）后，用消毒刀切成0.5cm厚左右的薄片