硅胶柱层析技术.doc

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1、1．确定干燥、不含溶剂的待分离粗产品的重量。2．用薄层色谱(TLC)选取溶剂体系，使Rf的值处于0.2～0.3之间。3．确定用于样品上柱的方法。可有三种选择：净试样法，溶液法(湿法)或硅胶吸附法(干法)；对于液体和固体，较为普遍的方法是溶液法(湿法)上样，即将样品溶于溶剂中，然后将溶液加入分离柱。4．确定合适的硅胶和化合物的比例。对于简单的分离，通常要求两者的比例为30~50：1(重量比)；但对比较困难的分离，需要的比例高达120：1。5．选取合适的分离柱——硅胶量决定了分离柱的尺寸，一般选用短而粗的加压柱。6

2、．选取合适的收集用容器——将硅胶体积除以4，然后选取能装下这个体积的容器就可(20L的硅胶对应于5L的组分)。7．装柱。戴好活性炭口罩，在(落地)通风橱中装好分离柱，干法和湿法装柱均可，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧密(太密了淋洗剂走的太慢)，一定要均匀(不然样品就会从一侧斜着下来)。8．加样。用少量的溶剂溶解待分离粗品，加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离(2～4cm)，再加压，这样避免了溶剂(如二氯甲烷等)夹带样

3、品快速下行。9．样品的收集。一边收集样品，一边进行色谱分析(TLC、LC-MS或HPLC)跟踪柱子的分离进程。10．将所需纯度的流出组分合并后用旋转蒸发仪进行浓缩。11．当完全除去溶剂后，进行分析(LC-MS、HPLC、或NMR等)，称重。12．按相关规程进行清场处理。