仪器分析高效液相色谱法ppt课件.ppt

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1、高效液相色谱法highperformanceliquidchromatography1以经典液相色谱法为基础，引入气相色谱的理论与实验方法，发展而成的分离分析方法。以高压泵输送液体流动相，采用高效固定相，实现在线检测和仪器化。具有分离效能高、分析速度快、应用范围广等的优点。第一节概述2与气相色谱法对比GC快速、分离效率高、样品用量少。在约300万个有机化合物中，可以直接用该法分析的占20%。HPLC快速、分离效率高、样品不受挥发性及热稳定性的约束，因而分析对象广。3与经典液相色谱法的比较LCHPLC固定相粒度(m)70~590%3~10

2、柱长（cm）10~10010~30柱内径（cm）2~50.1~0.5柱效（n）10~100103~105样品用量（g）1~1010-7~10-2分析时间（h）1~200.05~1装置非仪器化仪器化4第一节高效液相色谱法的主要类型和原理LLC和LSC分配、吸附、离子交换和空间排阻化学健合相色谱法ISC和PIC/IPC5二、化学键合相色谱法将固定液的官能团键合在载体的表面构成化学键合相。以化学键合相为固定相的色谱法称为键合相色谱法。键合相色谱法是应用最广的色谱法。6键合相色谱法正相色谱法反相色谱法RHPLCISCPICorIPC7（一）正相键

3、合相色谱法固定相：氰基、氨基化学键合相。氨基键合相色谱柱是分析糖类最重要的色谱柱。流动相：烷烃（底剂）+极性调节剂分离机制：范德华作用力（定向力、诱导力或氢键）流动相的极性与容量因子的关系：流动相极性，洗脱能力，k，tR8（二）反相键合相色谱法常用固定相：十八烷基硅烷（C18，ODS）常用流动相：甲醇—水，乙腈—水分析对象：非极性、中等极性的分子型化合物分离机制：疏溶剂理论认为在该法中溶质的保留是溶质分子与极性分子间的排斥力。9反相键合相色谱法影响保留行为的因素溶质的分子结构极性，疏水性，k，tR流动相与其表面张力和介电常

4、数有关，有机溶剂含量，k流动相的pH影响溶质的离解程度，离解程度，k固定相随碳链延长，键合相疏水性，k碳链一定时，键合相浓度，k10离子抑制色谱法ISCISC—调节RLLC流动相pH值以抑制组分的离解抑制剂：弱酸(HAc)、弱碱(NH3H2O)或缓冲液分离机制：调节流动相pH，抑制组分的理解，以中性分子的形式在固定相和流动相之间产生分配平衡。分析对象：3.0≤pKa≤7.0的弱酸7.0≤pKa≤7.0的弱碱两性化合物11ISC容量因子及其影响因素对于弱酸：流动相pH<组分pKa，k，tR流动相pH范围2~8固定相与反

5、相键合相一致12（三）反相离子对色谱法RPIC—在一般RLLC流动相中加入离子对试剂。常用的离子对试剂：分析碱用烷基磺酸盐，分析酸用四丁基季胺盐。分离机制：离子对试剂与被分析的离子形成中性离子对，在固定相和流动相之间产生分配平衡。分析对象：各类有机酸、碱、盐及两性化合物13保留机制-离子对模型B+HBH+RSO3NaRSO3-+Na++BH+RSO3-固定相BH+RSO3-14影响容量因子的因素离子对试剂的种类和浓度分析酸性类物质季铵盐分析碱性类物质烷基磺酸盐或硫酸盐PIC试剂碳链，k在低于胶束浓度时，PIC试剂浓度，k流动相

6、的pH影响PIC试剂和组分的离子化15小结色谱类型(Mode)固定相(StationaryPhase)流动相(MobilePhase)主要适用范围(CompoundSeparated)正相色谱(Normal-Phase)硅胶，氨基、氰基、二醇基键合硅胶……烷烃/极性调节剂在水中不溶解的物质或同分异构体反相色谱(Reversed-Phase)C18、氨基、氰基键合硅胶……水/有机溶剂中性、弱酸性、弱碱性物质离子抑制色谱(IonSuppression)C18、C8键合硅胶……水/有机溶剂弱酸、弱碱缓冲盐弱酸、弱碱、两性化合物离子对色谱(Ion

7、-Pair)C18、C8键合硅胶……水/有机溶剂离子对试剂有机酸、碱、盐及两性化合物16三、其他高效液相色谱法离子色谱法（ionchromatography）手性色谱法（chialchromatography）亲和色谱法（affinitychromatography）17离子色谱法（ionchromatography）离子交换色谱与电导检测器相结合分析各种离子的方法抑制型（双柱型）和非抑制型（单柱型）分离柱交换反应：R＋－OH－+NaX→R＋－X－+NaOH洗脱反应：R＋―X－+NaOH→R＋－OH－+NaX抑制柱与组分反应：R――H＋+

8、NaX→R――Na＋+HX与洗脱剂反应：R－―H＋+NaOH→R――Na＋+H2O18第二节HPLC的固定相和流动相及其选择固定相应满足下列要求颗粒细、均匀传质快机械强度高，耐高压化学稳定性好