豆粕中尿酶活性测定.pdf

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1、豆粕中酶活性测定尿酶(Urease)：生大豆中含不等量尿酶，尿酶本身无营养意义，但是它与抗胰蛋白酶含量接近，而且遇热失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此以尿酶活性用作豆粕加工适宜度的简单估测指标。但是加工适宜度不仅取决于畜种、年龄和畜禽阶段，也取决于大豆品种及储存状况。严寒损伤的大豆储存6个月以上，则抗胰蛋白酶含量会增加，但是未受损伤的大豆就没有这种现象。附录A大豆制品中尿素酶活性测定方法GB/T8622-1988A.1适用范围本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿酶活性的测定。本法可确认大豆的湿热处理程度。A.2定义本标准所指尿素酶活性定义如下：在(3

2、0±0.5)℃和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。A.3原理将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。A.4仪器设备A.4.1样品筛：孔径200mm;A.4.2酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置;A.4.3恒温水浴：可控温(30±0.5)℃;A.4.4试管：直径18mm，长150mm，有磨口塞子;A.4.5精密计时器;A.4.6粉碎机：粉碎时应不生强热(例如球磨机)A.4.7分析天平：感量0.0001

3、g;A.4.8移液管：10mL。A.5试剂和溶液A.5.1尿素：分析纯;A.5.2磷酸氢二钠：分析纯;A.5.3磷酸二氢钾：分析纯;A.5.4尿素缓冲溶液(pH6.9至7.0)：4.45g磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并稀释至1000mL，再将30g尿素溶在此缓冲溶液中，可保存1个月。A.5.5盐酸：分析纯，c(HCL)=0.1mol/L溶液;A.5.6氢氧化钠：分析纯，c(NaOH)=0.1mol/L标准溶液。A.6试样的制备用粉碎机将10g试样粉碎，使之全部通过样品筛。对特殊试样(水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品)应先在实验室温度下进行

4、预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。A.7测定步骤称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管中(如活性很高只称0.05g试样),移入10mL尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于(30±0.5)℃恒温水浴中，准确计时保持30min。即刻移入10mL盐酸溶液，迅速冷却到20℃。将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.70。另取试管作空白试验，移入10mL尿素缓冲液，10mL盐酸溶液。称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动。

5、将试管置于(30±0.5)℃的恒温水浴，同样准确保持30min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.70。A.8测定结果的计算A.8.1计算方法以每分钟每克大豆制品释放氮的毫克量表示的尿素酶活性U，按下式计算：14×c(V0-V)30×mU=式中：c——氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L;V0——空白试验消耗氢氧化钠溶液体积，mL;V——测定试样消耗氢氧化钠溶液体积，mL;m——试样质量，g。注：若试样经粉碎前的预干燥处理时，则14×c(V0-V)30×mU=×(1-S)式中：S——预干燥时试

6、样失重的百分率。A.8.2重复性同一分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之差不超过平均值的10%，以其算术平均值报告结果。附录B大豆制品中尿素酶活性快速检验将1份尿素、5份水，10份豆粉或豆粕置于小塑料袋中，封口30秒，如豆粕中有尿酶存在，它会将尿素转化为氨，打开袋口可闻到氨气，正常豆粕无气味。附录C大豆制品中尿素酶活性酚红法检测取约0.02g粉碎好的试样,放入试管中,加5mL水、0.02g尿素和2滴0.1%的酚红乙醇(20%)溶液,振摇10秒。观察溶，液颜色并记录时间。1min内变粉红色，酶活很强;1～5min变色，活性强;5～15min，略有

7、活性;15～30min，无活性;10min不变色者，合格。项目期待值范围生黄豆加热过度lastrow:yes">0.3↓0.05~0.201.750.05↓尿素酶pH增值法（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）