志贺氏菌的检验.ppt

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1、志贺氏菌的检验一、生物学特性（一）形态与染色革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛2~3um*0.5~0.7um（二）培养特性1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH6。4~7.82、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。（三）生化反应1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均不发酵乳糖。2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，不能利用柠檬酸盐。4、甲基

2、红阳性，靛基质不定。5、痢疾志贺氏菌不分解甘露醇，其它（福氏、鲍氏、宋内氏）均可分解甘露醇。二、志贺氏菌的致病性与食物中毒（一）传染源食物、病人、粪便、苍蝇等（二）志贺氏菌的致病性致病因素：侵袭力、菌体内毒素、外毒素临床症状A、急性细菌性痢疾：急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。B、慢性细菌性痢疾：慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。GB/T4789.5-2003中志贺氏菌检验程序三、志贺氏菌的检验（一）实验内容样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→生化学试验→→结果报告第一次样品处理和增菌培养预先准备并灭菌的器材规格名称数量1、18×180mm试管6支2、10ml移液管1支

3、3、直径为90mm平皿2套4、250ml量筒与500毫升广口瓶酌情7、不锈钢汤匙1把，玻璃珠，杜氏小管酌情（一）样品处理无菌操作称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min。（二）增菌培养放于36℃培养6～8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。第二次接种选择性平板进行分离培养（一）接种选择性平板取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或EMB（伊红美蓝）琼脂平板各1个。（二）培养放于36℃培养18～24h。结果：志贺氏菌在这些培

4、养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落HE平板原理及反应发酵乳糖的肠杆菌不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生硫化氢，可能是沙门氏菌不发酵乳糖，菌落呈蓝绿色或蓝色可能就是志贺氏菌SS平板原理及反应SSAgar(SalmonellaShigellaAgar)大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌是沙门氏菌。有黑色中心。如果没有黑色中心，就很可能是志贺氏菌了麦康凯琼脂平板菌落为粉红色，半透明的，可能为志贺氏菌EMB平板照片及原理菌落为无色半透明状，可能为志贺氏菌大肠杆菌第三次初步生化试验（一）接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体培养基从HE或SS、麦康凯或EMB琼脂平板、挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖

5、半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏。经36℃培养18～24h，分别观察结果。（二）培养放于36℃培养18～24h。结果：乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力志贺氏菌在TSI生长的结果（现象）：（1）斜面产碱仍为红色或粉红色；（2）底层产酸不产气，变黄色；（3）不产H2S，不出现黑色。志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长：沿线生长，无动力。三糖铁（TSI）琼脂试验的原理2－志贺氏菌3－沙门氏菌4－大肠杆菌葡萄糖半固体原理及结果。1.铜绿假单胞菌2.志贺氏菌3.枯草芽孢杆菌在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：（1）在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物（2

6、）在18~24h发酵乳糖、蔗糖的培养物（3）不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的培养物。（4）产气的培养物（5）有动力的培养物（6）产H2S的培养物第四天、进一步的生化试验凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做进一步的生化试验和生化分型实验。（一）进一步生化试验即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶，pH7.2尿素，KCN生长，以及水杨苷和七叶苷的分解，36℃培养。志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。接种生化培养基从三糖铁琼脂上挑取培养物上,接种到：5%乳糖发酵、甘露醇、棉籽糖和甘油发酵、靛基质试验。见P167：根据不同

7、生化反应结果，可分为A群（痢疾志贺氏菌）、B群（福氏志贺氏菌）、C群（鲍氏志贺氏菌）、D群（宋内氏志贺氏菌）。（二）生化分群试验各项生化试验现象葡萄糖铵：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性者不生长或生长极微小的菌落。西蒙氏柠檬酸盐：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿色转为蓝色，阴性者不生长。赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶：阳性者为紫色，阴性者为黄色。pH7.2尿素：阳性者为红色，阴性者为黄色。KCN：阳性者细菌生长，阴性者细菌不生长。水杨苷