补体检测及补体参与的试验备课讲稿.ppt

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1、补体检测及补体参与的试验补体的表达方式参与补体激活经典途径的固有成分按其被发现的先后顺序分别称C1、C2、……C9。C1由C1q、C1r、C1s三种亚单位组成补体系统旁路激活途径及调节因子中另一些组分以英文大写字母表示，如B因子、D因子、P因子、H因子等；补体调节成分多以其功能进行命名，如C1抑制物（C1INH）、C4结合蛋白（C4BP）补体活化后的裂解片段以该成分的符号后加小写英文字母表示，通常a为小片段，b为大片段：C2a、C2b具有活性成分的复合物在其字符上划一横线表示，如：C1～C9灭活的补体片段在其字符前加英文字母i表示，如iC3b对补体受体以其结合对象命名，如CLrR、C5Ar

2、、对C3片段受体则用CR1、CR2……CR4表示补体固有成份补体调节蛋白补体受体C1~C9,B、D、P因子C1INH、C4BP、H、I、S蛋白和血清羧肽酶等,MCP,DAF,HRPC1qR、C3b/C4bR(CRI)、C3dR(CRII)、H因子受体、C3a和C5a受体等补体系统组成第一节补体的理化特性与生物学功能90%的血清补体由肝脏合成感染部位活化的巨噬细胞能分泌几乎所有种类的补体成分补体的理化特性血清补体总量约为4g/l，C3含量最高不稳定，易受各种理化因素影响（热不稳定，56℃、30min即被灭活；射线、机械振荡、酒精、胆汁等可破坏补体）在0～10℃活性保持3～4天补体系统的激活1

3、.经典激活途径（classicalpathway，CP)2.旁路激活途径(alternativepathway，AP)3.甘露聚糖（MBL）激活途径1.经典激活途径抗原抗体复合物启动的，由C1—C9参与的一系列的酶促反应，其结果是靶细胞因细胞膜受攻击复合物作用而被裂解激活物：抗原—抗体（IgG、IgM）复合物Immunocomplex，IC循环免疫复合物CircularImmunocomplex，CIC激活顺序：识别阶段-活化阶段-膜攻击阶段2.旁路途径的激活经典激活途径替代激活途径MBL途径激活物质抗原抗体复合物肽聚糖、酵母多糖、脂多糖MBL相关的丝氨酸蛋白酶起始分子C1qC3C2、C4

4、参与成分C1-C9C3、C5-C9、B因子、D因子C2-C9、MASP所需离子Ca2+、Mg2+Mg2+Ca2+C3转化酶C4b2bC3bBbC4b2bC5转化酶C4b2b3bC3bnBbC4b2b3b生物作用参与特异性免疫的效应阶段,感染后期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用三种补体激活途径比较补体系统的生物学功能1.溶解细胞、细菌和病毒2.调理作用3.清除免疫复合物4.引起炎症反应5.免疫调节作用血清总补体活性测定（CH50试验）:以红细胞的溶解为指示，以50%溶血为判断终点。CP-CH50AP-CH50MBL-CH50第二

5、节血清总补体活性测定（一）实验原理：特异性抗体与红细胞结合后可激活补体，导致红细胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红细胞肿胀而发生溶血，溶血程度与补体的活性有关，与补体的剂量依赖呈S型曲线。30%-70%呈直线，50%溶血为终点（二）试验方法红细胞浓度的调整：2%~5%绵羊红细胞（SRBC）悬液溶血素的配制：是以SRBC免疫家兔所得的兔抗血清，即兔抗绵羊红细胞抗体。试验前要灭活补体及进行溶血素的稀释和滴定。稀释缓冲液：PH7.2~7.4磷酸盐缓冲液，必须含有Ca2+、Mg2+不同稀释度溶血素的配制最终稀释度稀释液(ml)稀释度溶血素（ml）1:10001.81:1000.21:200

6、00.21:10000.21:30000.41:10000.21:40000.21:20000.21:50000.81:10000.21:60000.21:30000.21:80000.21:40000.21:100000.21:50000.2所加溶血素溶血素的滴定11：10000.10.20.20.1全溶血21：20000.10.20.20.1全溶血31：30000.10.20.20.137℃全溶血41：40000.10.20.20.130分钟全溶血51：50000.10.20.20.1大部分溶血61：60000.10.20.20.1微溶血71：80000.10.20.20.1不溶血81

7、：100000.10.20.20.1不溶血9对照－－0.20.1不溶血管号溶血素试管内加入的试剂量（ml）稀释度溶血素补体(1:60)缓冲液2%SRBC结果以最高稀释度的溶血素仍能产生完全溶血为最大有效反应管(1:4000)即为1个单位，一般试验使用2个单位(1:2000)50%溶血标准管配制混匀后取2.5ml，随试验一起孵育。试剂用量溶血程度2%SRBC0.5ml100%DH2O2.0ml1.8%Nacl2.0ml50