甘肃省红古区草莓根际寄生线虫的分离与鉴定

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1、http://www.paper.edu.cn甘肃省红古区草莓根际寄生线虫的分离与鉴定雷宏斌李雪红甘肃农业大学草业学院，甘肃兰州（730070）E-mail：Leihb83@163.com摘要：2005年7月份，对甘肃省红古区张家寺草莓根际的植物寄生线虫进行了广泛调查，共采集到25份土壤样品，采用浅盘法共分离出了植物寄生线虫8个属，6个种和一些待定种。其中，包括短体线虫属(Pratylenchus)、螺旋线虫属(Helicotylenchus)、滑刃线虫属（Aphelenchoides）、剑线虫属（Xiphinema）、长针线虫属（Longidorus）、茎

2、线虫属（Diytlenchus）、根结线虫属（Meloidogyne）、大节片线虫属（Macroposthonia）。关键词：草莓根际寄生线虫分离种类鉴定植物寄生线虫是世界农作物，果树，林木，花卉及药材上重要的病原生物之一，其危害超过细菌和病毒，仅次于真菌病害(韩生成，刘清利等1999)，它对全世界农业产生有很大影响.据不完全统计，全世界每年因线虫危害所造成农作物经济损失约在1000亿美元以[1]上(Sasser.J.N.1989)。近年来，随着我国集约化高效农业的发展，各种经济作物发展迅速，草莓以其生长周期短、管理方便、果实营养丰富、柔软多汁而著称，尤其含

3、有大量的维生素[2]C，素有“水果皇后”的美称。一般栽植数月后就有产量，早春草莓可弥补水果的淡季市场，并可借助不同地理位置、气候条件及设施，在一年内进行多次生产，实现周年供应。80年代初，随着改革开放和农村经济体制改革的发展，各级政府及科研单位对草莓生产开始重视，使草莓生产迅速发展。引进并筛选一些优良品种在生产上迅速推广，栽培面积迅速扩大，栽培方式从原来单一的露地栽培发展为多种形式并存，大大提高了经济效益。草莓以其周期短、见效快、经济效益高、适于保护地栽培等特殊优势而成为中国果树业中发展最快的一项新兴产业，有的地区草莓种植业还成为当地农村经济发展的支柱产业。

4、但由于连年种植，复种指数高，致使线虫病的发生日趋严重，造成草莓的大幅度减产，生产上要求治理的呼声很高。针对此问题，本实验选择我省兰州市红古区草莓种植区定远镇作为实验的材料采集地，对该地区的草莓根际寄生性线虫作了初步的调查，对其种类进行分离和鉴定。1.材料和方法1.1草莓根际线虫土壤样品的采集[3]在草莓生长季节7月份从红古区张家寺，用随机五点取样的方法分别采集健株，轻病株，重病株三类草莓的根系及根周围5~20cm深的耕作层土壤（采集时，取具“结节状”明显的新病根及根际土壤），每份土样由5点取到的根围土组成。写好标签后随即放在聚乙烯薄膜袋中，带回实验室尽快分离

5、。1.2土壤样品的分离[4]用浅盘法分离不同发病程度的土样中的线虫：将200g土样平放在铺有一层面巾纸的筛盆中。把筛盆放在装有适量清水的底盘内，静置24h后移动筛盆，将底盘中的线虫悬浮液通过500目(孔径26µm)的筛子收集线虫于小烧杯中。-1-http://www.paper.edu.cn1.3线虫的杀死和固定[4]用热杀死法杀死收集的线虫后，用4%的福尔马林液固定，保存。1.4线虫数量的统计对固定保存的线虫进行统计：以每200g土样中分离出来的线虫为一个样本，将其放在培养皿中在解剖镜下计数。[1]1.5制片1.5.1临时玻片挑取固定后的线虫，放在载玻片的

6、水滴中，用挑针使虫体沉没水底。另取三根与线虫粗细相近的玻璃片，按三点等距排列在水滴边缘，再用挑针挑取线虫，尽量平行排列，加盖玻片，用凡士林封盖玻片边缘。1.5.2半永久玻片和永久玻片蠕虫状线虫的整体玻片制作半永久玻片时，在干净的载玻片中央滴一小滴甘油，其用量以加盖玻片以后正好铺满又不外溢为宜，用挑针移入已脱水的线虫3~5条，挑入并排好玻璃丝支架盖上温热的盖玻片(避免气泡)，用封固剂封好四周，可以封2~3次.待等一次封固剂干燥后，再封一次。以后依次类推。永久玻片封固时，用加热熔化的石蜡混合物先在载玻片上涂一层与盖玻片相当的薄蜡层环(或蜡方框)，待凝固后，在蜡环

7、(或蜡方框)中央放一滴浮载剂，移入线虫和支架物。加盖玻片后在65℃左右的电热板上热几分钟，使蜡环(方框)熔化，从而盖玻片下落，把浮载剂限制在中央。1.6镜检1.6.1根据形态学特征进行分类鉴定，主要观察雌虫的虫体形态、口针、会阴花纹、排泄孔、中食道球、阴门等；雄虫的虫体、排泄孔的位置、侧区、头小体、半月体、头冠、头区、口针等；二龄幼虫的虫体长度、侧区、半月体、头部、口针，背食道腺开口离口针基部球的距离(DGO)；尾和透明尾端等，观察以上各项，并对各形态特征进行测计，本试验采用Deman[5]公式来表示，常用的测计项目和参数如下：n=侧计的标本数L＝体长a=体

8、长/最大宽度b=体长/体前端至食道与肠连接处的距离c