日本血吸虫童虫早期诊断抗原模拟表位初步筛选探究

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1、日本血吸虫童虫早期诊断抗原模拟表位初步筛选探究　　【摘要】目的：利用噬菌体随机12肽库技术筛选日本血吸虫感染早期诊断抗原。方法：用日本血吸虫感染后21d兔血清从噬菌体12肽库中经3轮筛选，有效地富集与早期感染兔血清有亲和力的噬菌体克隆。随机挑取11个单克隆分别纯化、扩增，随后采用ELISA、DOT-ELISA等检测方法，挑选出与早期感染兔血清有高亲和力的噬菌体克隆。结果：挑选出3个与感染后21d兔血清具有高亲和力的噬菌体单克隆。结论：用感染后21d兔血清从噬菌体随机12肽库中能筛选到日本血吸虫童虫早期诊断抗原模拟表位。【关键词】日

2、本血吸虫；童虫；早期诊断抗原；模拟表位；筛选ScreeningontheMinotopesofEarlyDiagnosticAntigensofSchistosomulaofSchistosomaJaponicum/LIUXiang，NINGYong，XUEJin-ruo，etal.//MedicalInnovationofChina，2013，10（20）：001-002【Abstract】Objective：Toscreenthesimulatingantigenepitopesrelatedwithearlydiagnosi

3、ticantigensofS.jby12-mersrandompeptidelibrary.5Method：Afterperformingthreeroundsofpanningbyusingtheaffinityselectionwithinfectedrabbitseraat21thday，targetspecificphageswereeffectivelyenrichedfromarandom12-peptidesphagelibrary.11positiveclonesselectedrandomlyfromthemwe

4、recomparedandtheirantigenicabilitywasidentifiedbyELISA.ByusingELISA，phagecloneswithhighaffinitytoinfectedrabbitserawereobtained.Result：3ofthe11monoclonalphageswereobtained.Conclusion：ThepositivephagesimulatingepitopesofSchistosomulaofSchistosomajaponicumcanbeenobtaine

5、dfromarandom12-peptidesphagelibrary.【Keywords】Schistosomajaponicum；Schistosomula；Earlydiagnositicantigen；Minotopes；ScreenFirst-author’saddress：SchoolofMedicalLaboratory，HuBeiUniversityofChineseMedicine，Wuhan430065，Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2013.20.0015噬菌体展示技术是

6、利用外源性肽能以融合蛋白的形式呈现在丝状噬菌体的外壳蛋白表面，将编码多肽的外源DNA片段与噬菌体表面蛋白的编码基因融合[1]。这样多肽或蛋白不但以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，且可保持相对的空间结构和生物活性。用抗体、受体、核酸、以及某些碳水化合物即可以从随机肽库中筛选出与之结合的肽段，因此，只要有抗体，便可以从噬菌体展示肽库中筛选出与之相结合的特异性抗原表位。本研究拟通过用感染早期动物血清对随机12肽库的免疫筛选来获得日本血吸虫童虫早期诊断抗原的模拟表位，为日本血吸虫感染的早期诊断提供候选抗原表位。1材料与方法1.1材料1.

7、1.1钉螺及实验动物阳性钉螺购自湖南省血吸虫病防治研究所。日本大耳白兔购自武汉大学实验动物中心。1.1.2细菌及噬菌体文库大肠杆菌ER2537株及噬菌体随机12肽库（滴度为1.5×1013pfu/ml）均由中南大学湘雅医学院易新元教授惠赠。1.1.3试剂及仪器聚乙二醇（PEG-8000）、HRP标记的羊抗兔IgG、羊抗鼠IgG、96孔可拆分酶标板均购于武汉亚法生物技术拓展公司；HRP标记鼠抗M13单克隆抗体购自英国AmershamPharmaciaBiotech公司；TNT试剂（10mmol/LTris.ClpH8.0；150mm

8、ol/LNaCl；0.05%Tween20）、1%TBST（50mmol/LTris-HCI，pH7.5；150mmol/LNaCl；1%5Tween20）、TBS（50mmol/LTris-HCI，pH7.5；150mmol/LNaCl）、洗脱液