复方中药对免疫抑制小鼠免疫促进作用探究

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1、复方中药对免疫抑制小鼠免疫促进作用探究　　[摘要]目的从细胞及分子水平，探求中药复方对免疫功能增强的作用及效能，在扶正固本、活血益气的中药中遴选出有广阔应用前景的促进免疫的中药复方。方法50只昆明小鼠随机分成正常对照组、模型对照组与高剂量中药组、中剂量中药组、低剂量中药组。用环磷酰胺抑制小鼠免疫功能制作免疫抑制模型，观察用药后正常对照组、模型对照组与高剂量中药组、中剂量中药组、低剂量中药组血清IgG、补体C3，脾淋巴细胞表面抗原标志物CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD49b+，脾淋巴细胞细胞因子IL-2和IFN-γ及体重和脾指数。结果与模型对照组相比，

2、高剂量中药组、中剂量中药组、低剂量中药组体重和脾指数、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+差异无统计学意义（P>0.05），低剂量中药组血清IgG降低[（177.19±45.66）g/L]，CD49b+、补体C3及脾淋巴细胞细胞因子IL-2和IFN-γ升高[（32.43±6.31）%、（294.0±61.2）g/L、（38.44±7.82）%、（22.11±6.29）%]，差异均有统计学意义（均P　　[Keywords]Promotionofimmunity；CompoundChinesemedicine；Mice9免疫学是现代医学发展极为迅速的学科之一，疾病

3、发生发展很多都与免疫功能有关，某些肿瘤患者在放疗、化疗后或一些病毒感染后致免疫性力低下，但临床增强免疫力有明显临床疗效的药物却不多见。祖国医学认为“正虚邪扰”，疾病与人体的抵抗力密切相关，并且临床处方运用扶正祛邪的法则治疗疾病，临床观察亦有疗效，许多学者研究了多种单味药对免疫功能的调节作用，尝试发现、提取、合成能调节免疫的化合物，本实验旨在从细胞及分子水平出发，探求中药复方对免疫功能增强的作用及效能，在扶正固本、活血益气的中药中遴选出有广阔应用前景的促进免疫的中药复方。1材料与方法1.1材料1.1.1中药的制备复方中药（由西洋参、黄芪、枸杞、当归等多味药）组成，按总量400g（西洋参

4、96g、黄芪96g、枸杞128g、当归80g）称取处方各药（由江西省人民医院药剂科供应），加蒸馏水400mL，浸泡24h，隔水煮1h，滤过药液，药渣再加蒸馏水适量，煮1h，滤出药液，合并两次药液，隔水浓缩至400mL，即每1mL相当于1g生药的原液，灭菌封存备用。1.1.2实验动物96周龄昆明小鼠50只，体重（20±2）g，雌雄各半，均购自江西中医学院。动物自由饮食、饮水，动物质量合格证号：JIDWNO.2012-0041。试验过程中对动物的处置符合2006年科技部关于对试验动物的有关规定[1]。1.1.3试剂与仪器免疫抑制剂环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：12030625

5、），为200mg/支的粉针剂；小鼠IgG和补体C3的ELISA检测试剂盒为西唐生物公司进口分装产品（批号分别为：1208061、1208201）；Anti-MouseCD3（PE-Cy5）、Anti-MouseCD4（FITC）、Anti-MouseCD8（PE）、Anti-MouseCD19（PE）、Anti-MouseCD49（FITC）、Anti-MouseIL-2（PE）、Anti-MouseIFN-γ（FITC）荧光抗体（购于eBioscienceInc.SanDiego，CA公司，批号分别为E06065-1630、E00077-1630、E01036-1633、E0104

6、7-1630、E00752-1630、E02060-1630、E00862-1631）；BECKMANCOULTER流式细胞仪；酶标仪（550型）；倒置显微镜（Leica）；光学显微镜（OLYM-PUS）；红细胞裂解液（实验室制自备）；PBS缓冲液（实验室制自备）；16号小鼠灌胃针；Allegra64R低速冷冻离心机（BECKMANCOULTER，rmax=204mm）；HC电子天平（0.1g）、sarrorious电子天平（0.001g），300目金属筛网。1.2方法1.2.1药物急性毒理试验9该复方中药各组份临床应用广泛，未见明显毒副作用，因此用小鼠灌胃最大容量0.4mL/10g

7、[2]来检查药物的LD50，取20只小鼠，每次灌胃复方中药0.8mL，2次/d，观察15d，无一死亡，可见LD50>0.4mL/10g。1.2.2实验分组应用随机数字表法进行随机将动物分为5组：正常对照组、模型对照组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组。每组10只，雌雄各半。将需随机分组的雌雄性小鼠分别称重，按序编号记录体重结果，给每只小鼠鼠分配一个随机数，按随机数字大小升序排序，按排序后的顺序依次将小鼠分入各个剂量组。各组体重均值再做F检验（单因素