GBT 18643-2002 鸡马立克氏病诊断技术

《GBT 18643-2002 鸡马立克氏病诊断技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、cB/T18643-2002前言马立克氏病(Marek'sdisease简称MD)是鸡的一种由马立克氏病疙疹病毒(简称MDV)引起的传染性肿瘤性疾病。其病理组织学特征为外周神经、性腺、虹膜、各种内脏器官、肌肉和皮肤的单个或多个组织器官发生肿瘤性淋巴细胞浸润。病鸡表现为消瘦、肢体麻痹，并常有急性死亡。MD传染性强，死亡率高，是鸡的主要传染病之一。我国70年代末研究和建立了MD琼脂扩散特异性血清学诊断方法，先后研制和改进了用于MD血清学诊断用的MD皮肤抗原和MDV细胞培养抗原。这两种抗原用于MD的检测与国外同类进口抗原相比，具有同样的敏

2、感性。然而由于MD疫苗的使用，仅能预防MD肿瘤的发生，不能阻止环境中MD野外毒株的感染及在体内的复制;同时MD血清「型疫苗的应用，也可以刺激机体产生相应的抗体，并可以检测到病毒抗原的存在。因此，尽管MD琼脂扩散试验具有良好的特异性，MD琼脂扩散试验的检测结果，对于MD的临床诊断仅具有参考价值。MDV广泛存在于自然界中。除SPF鸡群外，几乎所有的鸡场都不同程度的存在着MDV野外毒株的流行。MDV野外毒株致病力强弱存在着差异，因此病鸡临床主要表现为神经型(古典型)和内脏型(急性型);此外，比较少见的还有皮肤型和眼型，有时可以混合发生。大

3、多数死于MD的鸡剖检时，在各内脏器官中可以见到单发性或多发性肿瘤，最常见的肿瘤发生部位有肝脏、肾脏、性腺等内脏器官。值得注意的是，其他一些禽病也可以导致内脏肿瘤的发生，如禽白血病(QA)和网状内皮增生病(RE)。其肿瘤的外观形态与MDV引起的肿瘤在临床剖检时无法区别，应通过病理组织学变化进行判定。另外，MD的临床诊断还可以通过MD特征性的临床症状和病理变化作为诊断依据。如病鸡临床症状表现为两腿前后伸展，呈“劈叉”姿势;尸体剖检时可见到坐骨神经单侧或双侧肿大、横纹消失、皮肤发生肿瘤、虹膜褪色和瞳孔不规则。这些变化在其他传染病很难见到，

4、可以作为MD的临床诊断指征。总之，由于MD发病机理及致病过程比较复杂，其血清学诊断方法应用范围有一定的局限性，对于临床诊断仅具有参考价值。而MD的特征性的临床症状及剖检病理变化在发病鸡群中并不常见，MD的临床诊断一般需要病理组织学检查进行确诊。本标准的附录A、附录B都是标准的附录。本标准由中华人民共和国农业部提示。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本标准主要起草人:赵晓岩、吴东来。中华人民共和国国家标准Gs/'r18643-2002鸡马立克氏病诊断技术Diagnotictech

5、niquesforMarek'sdisease1范围本标准规定了鸡马立克氏病(MD)的诊断技术。木标准适用于MD的流行学病普查、产地和口岸检疫、SPF鸡群的疫病监测2MD琼脂扩散试验检测技术鸡马立克氏病琼脂扩散试验既可以用于马立克氏病病毒抗原的检出，也可以用于马立克氏病病毒抗体的检出该方法一般在马立克氏病病毒感染14d-24d后检出病毒抗原;抗体的检出一般在病毒感染3周后2.1材料准备2.1门抗原和标准阳性血清。2门.2溶液配制:a)pH7.40.01mol/1-磷酸盐缓冲液;b)1%硫柳汞溶液;c)生理盐水。以上各种溶液配制方法见

6、附录A(标准的附录)。2门3琼脂板的制备:见附录s(标准的附录)。2.2操作方法2.2.1马立克氏病病毒抗原检测2.2.1.1打孔2.2门门.1在已制备的琼脂板(见附录s)上，用直径4mm或3mm直径的打孔器按六角形图案打孔，或用梅花形打孔器打孔。中心孔与外周孔距离为3mm,2.2.1.1.2将孔中的琼脂用8号针头斜面向上从右侧边缘插人，轻轻向左侧方向挑出，勿损坏孔的边缘，避免琼脂层脱离平皿底部。2.2.1.2封底用酒精灯火焰轻烤平皿底部至琼脂轻微溶化为止，封闭孔的底部，以防样品溶液侧漏2.2门.3加样用微量移液器吸取用灭菌生理盐水

7、稀释的标准阳性血清(按产品使用说明书的要求稀释)滴人中央孔，标准阳性抗原悬液分别加人外周的第1、第4孔中，在外周的第2,3,5,6孔处(不打孔)按顺序分别插人被检鸡的羽毛髓质端(长度约。.5cm);或在第2,3,5,6孔中加人被检的羽髓浸出液，每孔均以加满不溢出为度，每加一个样品应换一个吸头。2.2.1.4感作加样完毕后，静止5min-10min，将平皿轻轻倒置，放人湿盒内，置37C温箱中反应，分别在24h一.一~一------一----一一一-一~--中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2002-02-19批准2002-05-0

8、1实施Gs/'r18643-2002和48h观察结果。2.2.2马立克氏病抗体检测操作方法同2.2.1，加样如下:用微量移液器吸取用灭菌生理盐水(见附录A中A3)稀释的标准抗原液(按产品使用说明书的要求稀释)滴人中央孔，标准阳性血清分