gb 5009.139-2014 食品安全国家标准 饮料中咖啡因的测定

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1、中华人民共和国国家标准GB5009.139—2014食品安全国家标准饮料中咖啡因的测定2014-12-01发布2015-05-01实施GB5009.139—2014前言本标准代替GB/T5009.139-2003《饮料中咖啡因的测定》，GB/T19182-2003《咖啡咖啡因含量的测定-液相色谱法》。本标准与GB/T5009.139-2003相比，主要变化如下：——删除原标准GB/T5009.139-2003中第一法紫外分光光度法；——增加样品分类；——修改样品处理条件；——修改检出限，增加定量限；——修改色谱条件。

2、本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB/T5009.139-2003；——GB/T19182-2003。IGB5009.139—2014食品安全国家标准饮料中咖啡因的测定1范围本标准规定了可乐型饮料，咖啡、茶叶及其固体和液体饮料制品中咖啡因含量的测定方法—高效液相色谱法。本标准适用于可乐型饮料，咖啡、茶叶及其固体和液体饮料制品中咖啡因含量的测定。2原理可乐型饮料脱气后，用水提取、氧化镁净化；不含乳的咖啡及茶叶液体饮料制品用水提取、氧化镁净化；含乳的咖啡及茶叶液体饮料制品经三氯乙酸溶液沉降蛋白；咖啡、茶叶及其固

3、体饮料制品用水提取、氧化镁净化；然后经C18色谱柱分离，用紫外检测器检测，外标法定量。3试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1氧化镁（MgO）。3.1.2三氯乙酸(CCl3COOH)。3.1.3甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.2试剂配制三氯乙酸溶液（10g/L）：称取1g三氯乙酸（3.1.2）于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。3.3标准品咖啡因标准品（C8H10N4O2）：纯度≥99%。3.4标准溶液配制3.4.1咖啡因标准储备液（2.0mg/

4、mL）：准确称取咖啡因标准品20mg（精确至0.1mg）于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容。放置于4℃冰箱，有效期为六个月。3.4.2咖啡因标准中间液（200μg/mL）：准确吸取5.0mL咖啡因标准储备液（3.4.1）于50mL容量瓶中，用水定容。放置于4℃冰箱，有效期为一个月。3.4.3咖啡因标准曲线工作液：分别吸取咖啡因标准中间液（3.4.2）0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL至10mL容量瓶中，用水定容。该标准系列浓度分别为10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL、

5、100μg/mL、200μg/mL。临用时配制。1GB5009.139—20144仪器和设备4.1高效液相色谱仪，带紫外检测器或二极管阵列检测器。4.2天平：感量为0.1mg。4.3水浴锅。4.4超声波清洗器。4.50.45μm微孔水相滤膜。5分析步骤5.1试样制备5.1.1可乐型饮料：a)脱气：样品用超声清洗器在40℃下超声5min；b)净化：称取5g（精确至0.001g）样品，加水定容至5mL（使样品溶液中咖啡因含量在标准曲线范围内），摇匀，加入0.5g氧化镁，振摇，静置，取上清液经微孔滤膜过滤，备用。5.1.2

6、不含乳的咖啡及茶叶液体制品：称取5g（精确至0.001g）样品，加水定容至5mL（使样品溶液中咖啡因含量在标准曲线范围内），摇匀，加入0.5g氧化镁，振摇，静置，取上清液经微孔滤膜过滤，备用。5.1.3含乳的咖啡及茶叶液体制品：称取1g（精确至0.001g）样品，加入三氯乙酸溶液定容至10mL（使样品溶液中咖啡因含量在标准曲线范围内），摇匀，静置，沉降蛋白，取上清液经微孔滤膜过滤，备用。5.1.4咖啡、茶叶及其固体制品：称取1g（精确至0.001g）经粉碎低于30目的均匀样品于250mL锥形瓶中，加入约200mL水，

7、沸水浴30min，不时振摇，取出流水冷却1min，加入5g氧化镁，振摇，再放入沸水浴20min，取出锥形瓶，冷却至室温，转移至250mL容量瓶中，加水定容至刻度（使样品溶液中咖啡因含量在标准曲线范围内），摇匀，静置，取上清液经微孔滤膜过滤，备用。5.2仪器参考条件色谱柱：C18柱（粒径5μm，柱长150mm×直径3.9mm）或同等性能的色谱柱。流动相：甲醇+水=24+76。流速：1.0mL/min。检测波长：272nm。柱温：25℃。进样量：10μL。5.3标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入液相色谱仪中，测定相应

8、的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线（咖啡因标准色谱图见附录A中图A.1）。5.4试样溶液的测定将试样溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，同时记录峰面积，根据标准曲线得到待测液中咖啡因的浓度，平行测定次数不少于两次。6分析结果的表述2GB5009.139—2014试样中咖啡因含量按公式（1）计算：cV1000