医学--ngf与脑出血.pptx

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1、NGF与脑出血目录动物实验临床研究病例分享外源性NGF（苏肽生）对大鼠脑出血的有效性研究华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科唐洲平教授主要内容研究背景与意义第一部分：脑出血模型的制作第二部分：NGF(苏肽生)治疗大鼠脑出血的研究研究背景及意义死亡率高达35%致残率达95%NGF的概述20世纪50年代初，Levi-MontalciniR在小鼠肉瘤细胞内发现的第一个神经营养因子--NGF（nervegrowthfactor）。它是一种由α、β及γ3亚基组成的活性蛋白质，主要是由神经元、神经支配的靶组织或胶质细胞表达产生的，具有促进中枢和外周神经分化、生长和存活的功

2、能。NGF分子的四级结构示意图上图为NGF的四级结构，α亚基（红色），γ亚基（绿色）具有蛋白酶活性，β亚基（蓝色）具有生物活性。NGF（苏肽生）的有效性研究目的：大鼠脑出血模型，实验组大鼠给予NGF处理，探讨外源性NGF对大鼠脑出血的作用机制。材料NGF（苏肽生，北京舒泰神公司）小鼠抗大鼠Nestin抗体（英国Abcam公司）小鼠抗大鼠VEGF抗体（英国Abcam公司）HRP（辣根过氧化物酶，北京中杉金桥公司）方法将总共48只SD大鼠随机分成三组，即实验组（NGF组）24只、对照组12只和假手术组12只，每组大鼠取三个时间点：第1、3以及7天。实验组大鼠造模后半小时

3、通过颅内血肿处注入NGF混合液（2μl，300U）。对照组大鼠给予同样体积无菌生理盐水。假手术组打开头皮只进针，不给药和盐水。数据分析对各组大鼠行神经功能缺损评分。将各组大鼠脑组织固定后脱水，制成石蜡切片，厚度约为4μm，行免疫组化染色，检测Nestin以及VEGF阳性细胞，计数。将三组大鼠的神经功能缺损评分、Nestin以及VEGF阳性细胞数行统计学分析。结果表2：第1天和第3天三组评分几乎相同，第7天实验组神经功能缺损评分要显著低于对照组（P＜0.05），两组与假手术组比较均有显著差异。表2：三组不同时间点ZeaLong评分免疫组化检测表3：①实验组和对照组有显

4、著性差异（P＜0.05）。②实验组间第7天和第3天与第1天对比有统计学意义（P＜0.05）。实验组和假手术组有显著性差异（P＜0.01）。只数第1天第3天第7天实验组67.9±1.8①9.5±2.4①11.6±2.7①②对照组35.8±2.06.5±1.58.0±1.6假手术组31.1±0.21.0±0.81.4±0.6表3：三组于第1、3、7天的Nestin单标阳性细胞计数（均数±标准差）免疫组化检测表4:①实验组和对照组有显著性差异（P＜0.05）。②实验组间第7天和第3天与第1天对比有统计学意义（P＜0.05）。实验组和假手术组有显著性差异（P＜0.01）。只

5、数第1天第3天第7天实验组65.5±1.7①7.3±1.9①9.4±2.0①②对照组34.3±1.45.6±2.16.1±1.3假手术组30.6±0.40.8±0.30.7±0.1表4：三组于第1、3、7天的VEGF单标阳性细胞计数（均数±标准差）免疫组化染色图片图A、B、C为三组术后第1天比较Nestin阳性细胞无明显差异（×400）。ABC免疫组化染色图片图A、B、C为三组术后第3天比较，图C(实验组)的Nestin阳性细胞增多（P＜0.05），图B(对照组)也可见少量阳性细胞（×400）。ABC免疫组化染色图片图A、B、C为三组术后第7天比较，图C(实验组)的

6、Nestin阳性细胞明显增多（P＜0.01）（×400）。ABC免疫组化染色图片图A、B、C为三组术后第1天比较VEGF阳性细胞无明显差异（×400）。ABC免疫组化染色图片图A、B、C为三组第3天比较，图C（实验组）的VEGF阳性细胞增多（P＜0.05）（×400）。ABC免疫组化染色图片图A、B、C为三组第7天比较，图C（实验组)的VEGF阳性细胞明显增多（P＜0.01）（×400）。ABC结果将三组大鼠脑切片行统计学分析，显示①Nestin与VEGF阳性细胞数，实验组与对照组有显著差异（p＜0.05）；②实验组间第7天和第3天与第1天对比有统计学意义（P＜0.

7、05）；③实验组和假手术组有显著性差异（P＜0.01）。讨论通过对大鼠脑出血模型实验研究，显示外源性NGF可以促进内源性NSCs激活、增殖、迁移以及分化；同时促进神经细胞表达VEGF，新生血管形成。最终使颅内受损的神经细胞得到有效的修复，促进机体的神经功能恢复。其机制为外源性NGF通过与NSCs上特异受体（如TrkA及p75）结合，激活细胞内第二信使体系，产生级联反应，促使细胞核表达细胞分化。NGF的信号传导通路示意图JunyingYuan,BruceA.Yankner.Apoptosisinthenervoussystem:Neuronalsurvivalpa