光学显微术-2011年.ppt

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1、光学显微术显微镜主要光学部件构造相差显微镜原理和使用荧光显微镜原理和使用OrlandoScienceCenterMarch2003一、显微镜主要光学部件构造OrlandoScienceCenterMarch2003被检物AB放在物镜(O1)下方的一倍焦距之间，则在物镜(O1)后方形成一个倒立得放大实像，这个实像正好位于目镜(O2)的下焦点之内，通过目镜后形成一个放大的虚像A2B2，这个虚像通过调焦装置使其落在眼睛明视距处，即25cm，使所看到的物体最清晰，也就是虚像A2B2是在眼睛晶状体的两倍焦距之外，在眼球后的视网膜形成一个倒立的A2B2缩小像A3B3。显微镜的光学原理Orl

2、andoScienceCenterMarch20031.物镜（Objective）OrlandoScienceCenterMarch20031.1物镜的光学性质放大倍数：与透镜的焦距成反比，与光学筒长成正比光学筒长（160mm）放大倍数＝——————————焦距OrlandoScienceCenterMarch2003工作距离：物镜下透镜的下表面与载片物像的距离。物镜放大倍数愈大，工作距离愈小在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：物镜镜口率(N.A.)工作距离(mm)10×0.255.4040×0.65

3、0.39100×1.300.11OrlandoScienceCenterMarch2003数值口径（NA）：其大小与显微镜的分辨率有关。NA＝η·sinα/2焦深：物镜视野中能清晰观察到物像的垂直范围。一般随物镜放大倍数增加而减小。OrlandoScienceCenterMarch20033.分辨力：指分辨物体最小间隔的能力。光学显微镜的分辨力R=0.61λ/N．A．其中λ为入射光线波长；N．A．为镜口率＝ｎsinα/2；n=介质折射率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角）OrlandoScienceCenterMarch2003几种介质的折射率OrlandoScienceCen

4、terMarch2003显微镜的几个光学特点：介质折射率越接近镜头玻璃的（1.7）越好；sinα/2的最大值小于1；油镜介质为香柏油，镜口率可接近1.5；普通光线的波长为400~700nm，光镜分辨力约为0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm，因此显微镜的最大有效倍数为1000X。OrlandoScienceCenterMarch2003OrlandoScienceCenterMarch2003色差系白色光经透镜后各单色光焦点不一致的现象一般可用一个含钙的双凸透镜和外包两个含铅的单凸透镜组成的消色差透镜校正OrlandoScienceCenterMarch2003球面像差系入射透

5、镜中部和边缘部分的光线折射后在不同的点上聚焦而产生，可用含多组透镜的消错透镜来校正。OrlandoScienceCenterMarch2003像散：系透镜在成像过程中使物像在水平或垂直轴面上产生分散的现象。慧形像差：系透镜在成像过程中产生慧形拖尾的现象。像场弯曲：系透镜在成像过程中发生的像场弯曲的现象。畸变：系透镜在成像过程中产生畸形像场的现象。OrlandoScienceCenterMarch20031.2物镜的种类消色差物镜:代号A或Ach，能消除红蓝两种色光的色差，并校正黄绿色光的球面像差。复色差物镜：代号Apo，能消除红、绿、蓝三种色光的色差和红、绿两种色光的球面像差。

6、半复消色差物镜：代号Semi–Apo，性能介于以上两种物镜之间，价格居中的物镜。OrlandoScienceCenterMarch2003平场与超平场物镜：代号Plan与Splan，系经特殊设计和加工完全消除了球面像差和其它像差的高级物镜。其它专用物镜：如供像差、荧光、偏光和微分干涉等特殊显微观察用的物镜。可调节的物镜：包括可随盖玻片厚度变化调节的高倍物镜和带有缓冲弹簧的油镜和高倍镜。OrlandoScienceCenterMarch2003OrlandoScienceCenterMarch20032.目镜2.1作用：放大，投射，补光校正。250mm（明视距离）放大倍数＝———

7、———————焦距（mm）1000×物镜NA值最适目镜放大倍数＝——————————物镜的放大倍数OrlandoScienceCenterMarch20032.2构造：包括标准接目透镜、会聚透镜和光阑三部分2.3类型惠更斯目镜：代号H，亦称负目镜。两个平凸透镜均按凸面向下排列，其光阑为中空的圆形光阑。雷姆斯登目镜：代号R，亦称正目镜。两个平凸透镜的凸面相对排列，光阑在下透镜之下。OrlandoScienceCenterMarch2003OrlandoScienceCenterMarch20