瘢痕成纤维细胞钙网蛋白表达论文.doc

《瘢痕成纤维细胞钙网蛋白表达论文.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、瘢痕成纤维细胞钙网蛋白表达论文目的观察钙网蛋白(CRT)在瘢痕及正常皮肤成纤维细胞内的表达情况。方法采用免疫细胞化学染色和原位ELISA技术对体外培养的瘢痕及正常皮肤成纤维细胞进行CRT分布定位及表达水平探究。结果瘢痕和正常皮肤成纤维细胞在处于增殖生长状态时，胞浆及核内均有不同程度的CRT表达，其中瘢痕成纤维细胞表达CRT水平(A摘要:1.97±0.15,ELISA492nm)明显高于正常皮肤成纤维细胞水平(A摘要:1.43±0.12),差异有非常显著意义(P＜0.01)；而在已融合的瘢痕和正常皮肤成纤维细胞内则均无CRT表

2、达。结论瘢痕成纤维细胞内CRT的丰富表达对促进细胞迁移、信号传递及钙存储等方面均有着积极功能。Studyontheexpressionofcalreticulininhypertrophicscar-derivedfibroblasts【AbstractObjectiveToinvestigatetheexpressionlevelandintracellulardistributionofcalreticulin(CRT)inhypertrophicscar-derivedfibroblasts(HSF)andnormal

3、skin-derivedfibroblasts(NSF).MethodsUsinganti-CRTantibody,CRTwasdetectedinHSFandNSFbyimmunocytochemistryandELISAtechnique.ResultsCRTwaspresentinthecytoplasmandnucleiinproliferatingHSForNSFinculture,butHSFpossessedsignificantlyhigherexpressionlevelofCRTthanNSF(P＜0.0

4、1).Whenthesecells(HSFandNSF)werefused,neitherintracellularnorintranuclearstainingforCRTwasobserved.ConclusionInHSFandNSF,thedistributionofCRTiswidespread.BecauseofitsabundantexpressioninHSF,wepostulatethatCRTasamultifunctionalproteinplaysanimportantroleinCa2+seques

5、tering,integrin-mediatedsignallingandcelladhesion.【KeywordsHypertrophicscarFibroblastCalreticulinExpression6学海无涯增生性瘢痕(Hypertrophicscar,HS)作为创伤及外科手术后常见且十分棘手的皮肤组织疾病，瘢痕组织内成纤维细胞异常活化和细胞外间质过度沉积既是HS的重要组织学特征，也是HS发生、发展的物质基础。钙网蛋白(Calreticulin,CRT)最早是作为一种存在于非肌细胞内质网上的主要钙结合蛋白得以

6、熟悉的［1］，近几年的探究发现摘要：除具有钙离子储藏功能外，CRT在参和并调节众多细胞生物学活性功能上有着积极影响［2-5］，同时它还作为自身抗原在某些免疫性疾病的发病机制中有着极其重要的价值［6］。我们通过CRT抗体并利用原位ELISA及免疫细胞化学染色技术检测瘢痕成纤维细胞体外表达CRT水平，辅以正常皮肤成纤维细胞作对照，探索CRT在瘢痕成纤维细胞发挥异常生物学活性功能中的功能。1材料和方法1.1组织标本增生性瘢痕及正常皮肤组织标本均取自住院病人，年龄17～40岁。患者在取标本前无长时间外用各种防治增生性瘢痕药物史，不伴

7、肿瘤及其他严重疾患；瘢痕组织生长时间均在6～9个月之间。1.2主要试剂及物品预备羊抗CRT抗体摘要：Michalak博士惠赠。辣根过氧化物酶标记兔抗羊IgG(Zymed公司)。DAB及OPD(Sigma公司)。细胞培养基摘要：DMEM添加10%小牛血清(上海华美生物技术有限公司)。96孔塑料培养板及100mm培养皿(丹麦Nunc公司)。1.3成纤维细胞培养手术切取增生性瘢痕及正常皮肤组织，去皮下脂肪，0.01%新洁尔灭浸洗10min，PBS洗3次，用组织剪将组织剪成细小碎块并接种于培养皿内，加少量10%小牛血清的DMEM培养

8、基，37℃5%CO2静止培养，3天后补充少量培养剂，隔2天换液，见有细胞从组织块爬出生长后天天换液，传代。1.4CRT免疫细胞化学染色体外培养的成纤维细胞去培养基后，PBS轻洗，2%多聚甲醛固定10min，0.3%双氧水反应5min，PBS再洗；二抗血清37℃20min，抗CRT抗体37℃